La colesterol oxidasa de rhodococcus equicaracterización genética, papel en la virulencia y aplicación en el diagnóstico

Abstract

Rhodococcus equi es una bacteria Gram + incluída en el grupo de los actinomicetos. Es un patógeno intracelular que infecta a varios animales domésticos, principalmente a ptoros y cerdos, y también al hombre, dónde se presenta como patógeno oportunista. Produce bronconeumonías purulentas y enteritis en potros. En humanos causa una infección pulmonar similar a la tuberculosis. En esta tesis se ha realizado una caracterización del gen choE de R.equi que codifica la colesterol oxidasa, proteína membranoactiva que es un importante factor citolítico de esta bacteria. Por mutagénesis sitio-específica en el gen choE se han construido varios mutantes sin actividad colesterol oxidasa. Estos mutantes se obtuvieron por intercambio alélico y para ello fue necesario poner a punto una serie de herramientas genéticas en R.equí consistentes en varios marcadores de selección, un sistema de transferencia de DNA eficiente y un método de recombinación homóloga. Para analizar el papel de la colesterol oxidasa en la virulencia de R.equi se realizaron ensayos de infección en macrófagos murinos J774A.1 y en células epiteliales Caco-2 y también en ratones BALB/c. Por otra parte, se ha desarrollado un sistema de identificación de R.equí por PCR usando como diana el gen choE. Este sistema, ensayado en un total de 165 cepas de R.equi y de otras especies relacionadas filogenéticamente, nos ha permitido asignar al taxón R.equí la cepa ATCC 21387, clasificada previamente como Brevibacterium sterolicum. Además se ha podido discriminar varias cepas pertenecientes a otras especies que habían sido identificadas en origen erróneamente como R.equi.