Estudio del citocromo C y péptidos procedentes de proteínas involucradas en apoptosisInteracción con sistemas modelo de membranas

Abstract

El trabajo de tesis doctoral consistió en 5 capítulos experimentales. En el primer capítulo experimental se realizó el estudio del citocromo c en su interacción con sistemas modelo de membrana. En concreto se intentó observar si existía especificidad de interacción con el fosfolípido cardiolipina empleando como control el ácido fosfatídico. Los estudios fueron realizados para ambos estados redox de la proteína y analizados mediante espectroscopia infrarroja bidimensional. Los resultados obtenidos mostraron especificidad de interacción de la proteína con la cardiolipina y diferencias en función del estado redox, pudiendo los resultados obtenidos presentar implicaciones biológicas en la función in vivo de la proteína. En los capítulos experimentales 2º y 4º se estudiaron las proteínas proapoptóticas del tipo 'sólo BH3' Hrk y Bik. Los análisis de hidrofobicidad y anfipaticidad mostraron en ambos casos la existencia de una región en la porción C-terminal de ambas proteínas con elevada tendencia a interaccionar con las membranas. Dichas regiones fueron las empleadas para la realización de los estudios biofísicos en los que se determinó que en ambos casos presentaban una gran eficiencia de interacción con membranas, generando una estructura en hélice alfa transmembrana. En el caso de la proteína Hrk se observó que el dominio C-terminal presentaba dependencia en la orientación y en la estructura secundaria con la composición fosfolipídica. En el capítulo experimental 3º se realizaron análisis estructurales de diversos dominios BH3 de la proteína Hrk de función conocida. En concreto se estudió la secuencia silvestre y 6 secuencias mutantes. Los análisis estructurales no mostraron diferencias significativas