Caracterización del cocleograma de ratón CBA en un modelo de ototoxicidad inducido por ruido
- Sanz López, Lorena
- Teresa Jesús Rivera Rodríguez Director
- Isabel Varela Nieto Co-director
- Carlos Avendaño Trueba Co-director
Universidade de defensa: Universidad de Alcalá
Fecha de defensa: 20 de decembro de 2013
- José Manuel Juiz Gómez Presidente/a
- Ignacio Cobeta Marco Secretario/a
- Juan Ignacio de Diego Sastre Vogal
- José Ramón García Berrocal Vogal
- Julio Contreras Rodríguez Vogal
Tipo: Tese
Resumo
La pérdida auditiva inducida por ruido es la forma más frecuente de sordera adquirida, especialmente en sociedades industrializadas. Consiste en la exposición a sonidos de intensidad suficiente capaces de producir una pérdida auditiva temporal o permanente. Este efecto es acumulativo a lo largo de la vida, siendo actualmente la prevención la medida más efectiva contra este problema. El ruido puede dañar la mayoría de las poblaciones celulares de la cóclea pero las células ciliadas son la diana más señalada. Un cocleograma es un registro gráfico donde se representan las células ciliadas a lo largo de la longitud de la membrana basilar, se caracteriza por ser capaz de relacionar el daño celular con variaciones de los umbrales auditivos para frecuencias específicas. Es por ello, que queremos analizar si existe una correlación funcional y anatomohistológica en los cocleogramas de ratones CBA sometidos a un modelo de ototoxicidad inducido por ruido, así como el valor pronóstico del factor de crecimiento semejante a insulina tipo 1 (IGF1) en el daño auditivo causado por la exposición a ruido. MATERIAL Y METODOS: Se establecen cuatro grupos experimentales de ratones CBA machos con dos meses de vida al inicio del ensayo. Según el tipo de exposición a ruido se define un grupo control sin exposición (n=12), grupo de ruido 105 dB SPL (centrado en 2-22 kHz, n=12), grupo de ruido "láser" a 105 dB SPL (centrado en 8-13 kHz, n=12) y grupo de ruido 120 dB SPL (centrado en 2-22 kHz, n=8). Se realiza en todos los animales una exploración neurofuncional no invasiva (potenciales evocados auditivos de tronco cerebral "ABR" y productos de distorsión de las emisiones otoacústicas "DPOAES") de forma basal para confirmar que son normoyentes y posteriormente en diferentes momentos tras la exposición a ruido (2, 14 y 28 días). Se realiza una extracción sanguínea en tres tiempos (basal, medio y final) para determinar los niveles de IGF-1 en suero mediante un Kit comercial (OCTEIA Rat/Mouse IGF-I ELISA AC18PL). Al finalizar el ensayo los animales son sacrificados para conocer morfológicamente la citoarquitectura de las células ciliadas mediante técnicas de histología convencional (tinción de Nissl cresil violeta) y de recuento celular del órgano de Corti (tinción de faloidina y dapi). Se diseña un método de recuento celular para estudiar el comportamiento celular a lo largo de la longitud de la cóclea. Mediante el software estereológico "CAST", se define un área de estudio en las cócleas de los ratones y se realiza un muestreo aleatorizado para estudiar la densidad de las células ciliadas en los disectores delimitados. Las células se analizan de forma sistematizada a lo largo de todos los sectores de la cóclea (espira apical, media y basal). Los datos estadísticos se evalúan con el SPSS V15.0 mediante el modelo lineal general de medidas repetidas y el test de correlación de Pearson. RESULTADOS: Existe un aumento de los umbrales de ABR para los estímulos tipo click y para tonos puros (8, 16, 20, 28 y 40 Hz). El grupo control se mantiene en el tiempo, pero encontramos diferencias estadísticas altamente significativas con respecto a los otros tres grupos del ruido (p<0,000), encontrando una gradación del daño: ruido 120>ruido 105>ruido "láser". Existe una disminución de las latencias pico e interpico (especialmente I-II) y de la amplitud de los picos I y II que se mantienen en el tiempo con diferencias significativas entre el grupo control y los grupos expuestos a ruido (p<0,000). Los DPgramas de los grupos expuestos a ruido experimentan un aumento marcado de umbrales auditivos, con diferencias significativas para todas las frecuencias respecto al control, pero sin diferencias entre ellos. La concentración media en suero de IGF-1 (ng/ml) obtenida fue de 463,13 +/- 109,315, y observamos que estos valores disminuyen en el tiempo de forma progresiva. Existe una menor concentración de IGF-1 a medida que empeoran los umbrales de audición por encima de 60 dB (Coeficiente de Pearson = -3,95, p: 0,031). El estudio morfológico convencional permite ver una pérdida de fibrocitos en el ligamento espiral y en el limbo, junto con una desorganización del órgano de Corti en los grupos expuestos a ruido. El método de recuento celular muestra una pérdida, desorganización y aplastamiento de las células ciliadas e incluso disrupciones de la membrana basilar en los grupos expuestos a ruido (120 dB SPL >ruido 105 dB SPL > ruido "láser" > grupo control), mostrando diferencias significativas en las diferentes espiras de la cóclea (p<0,005) según el tipo de ruido. Los cocleogramas específicos revelan diferencias significativas entre los diferentes grupos experimentales. CONCLUSIONES: Los ratones CBA expuestos a ruido experimentan un desplazamiento de los umbrales auditivos. El grupo de ruido 120 dB SPL experimenta un mayor incremento del umbral auditivo, seguido del ruido 105 dB SPL y ruido "láser". El método de recuento de densidad celular evalúa el número y daño de las CC del OC correlacionándose eficazmente con la tonotopía coclear en cada uno de los grupos del estudio. El descenso de los niveles de IGF-1 es un potencial marcador bioquímico de daño celular tras la exposición a ruido. Existe una correlación entre los niveles de IGF-1 en suero y el umbral auditivo, de manera que a menor nivel de IGF-1, hay un mayor nivel de umbral auditivo.