Regulación del ciclo celular y la integridad genómica por la proteína lana2 de kshv

Resumen

El virus del Sarcoma de Kaposi (KSHV), también conocido como herpesvirus humano 8 (HHV8), se encuentra asociado con tres enfermedades proliferativas: enfermedad multicéntrica de Castleman (CD), sarcoma de Kaposi (KS), y linfoma de efusión primario (PEL). El genoma de KSHV contiene un grupo de marcos abiertos de lectura (ORFs) que codifican proteínas con homología a factores de transcripción de la familia de factores reguladores del interferón (vIRFs). El ORFK10.5 codifica el antígeno nuclear asociado a latencia 2 (LANA2), también llamado vIRF3, que únicamente se expresa en células hematopoyéticas infectadas con KSHV. Se ha sugerido que LANA2 juega un importante papel en la tumorogénesis mediada por KSHV y además la proteína es necesaria para la supervivencia de las células B infectadas con KSHV o co-infectadas con el virus de Epstein-Barr y KSHV. En este trabajo analizamos las consecuencias de la expresión de LANA2 en diferentes sistemas celulares. Demostramos que LANA2 induce amplificación del número de centrosomas, interacciona con microtúbulos de una manera dependiente del ciclo celular e inhibe el punto de control del ensamblaje del huso mitótico. Consecuentemente, LANA2 promueve inestabilidad cromosómica y activación de las vías de respuesta de daño al ADN. El resultado de esta inestabilidad cromosómica es inducir la muerte de aquellas células primarias que expresan la proteína viral, o favorecer la actividad transformante mediada por Ras. Además, la expresión de LANA2 también induce una ventaja proliferativa en células inmortales, aunque no es capaz de transformar células por sí sola. La inducción de inestabilidad cromosómica por LANA2 podría estar mediada por la modulación de las ¿pocket proteins¿ pRb, p107 y p130. En este sentido, hemos observado que LANA2 induce la hiperfosforilación de p107 y p130, inhibe el arresto de la proliferación celular mediado por pRb, e inhibe la sumoilación de las tres ¿pocket proteins¿. Además, pRb podría jugar un papel en la inhibición del arresto en G2/M que resulta del tratamiento con nocodazol o con peróxido de hidrógeno por la proteína viral. Se ha sugerido que la modificación por SUMO2 de pRb puede estar relacionada con la inducción de senescencia, por lo que la expresión de LANA2 estaría inhibiendo el proceso de senescencia y contribuyendo de ese modo a la transformación de las células infectadas por KSHV. Hasta el momento no se ha descrito cómo se regula la transcripción de LANA2. En este trabajo identificamos una región situada por delante de la secuencia codificante de LANA2 que favorece la transcripción de la proteína al ser transfectada en células B, y un supuesto elemento de respuesta RBP-J¿ que modula negativamente su expresión, así como se ha descrito para otros genes de KSHV. Todos estos resultados en conjunto identifican la inducción de inestabilidad cromosómica por LANA2 como un nuevo mecanismo que podría contribuir a la patogénesis del virus, y señala a las ¿pocket proteins¿ pRb, p107 y p130 como importantes proteínas en este proceso. Estos resultados también indican que aunque LANA2 puede controlar distintas vías de regulación del ciclo celular, no es suficiente por sí sola para inducir transformación celular. Finalmente, nuestros resultados también indican que RBP-J¿ podría ser un regulador crucial de la transcripción de LANA2.