Nuevas estrategias analíticas de extracciones selectivas en continuo acopladas a la cromatografía de líquidos para la determinación de antibióticos en muestras biológicas

Resumen

En los últimos años ha ido en aumento el número de bacterias que se han hecho resistentes a los antibióticos, siendo la causa principal el uso inapropiado de los mismos, ya que se ha abusado de su consumo, tomándolos cuando no son realmente necesarios o no finalizándose los tratamientos; en su uso veterinario también se abusa de ellos y se han utilizado incluso como promotores del crecimiento, además de que en ocasiones no se respetan los tiempos de retirada. Esto, unido a las numerosas vías de transmisión existentes en el medio ambiente, provoca que las bacterias estén expuestas durante largos periodos de tiempo a cantidades de antibiótico que no son suficientes para destruirlas, lo que les permite adaptarse y propagarse por diferentes vías, pudiendo pasar a los alimentos y a través de éstos al hombre. Las bacterias que se han hecho resistentes a un determinado antibiótico, pueden serlo también a otros que tengan estructura y mecanismo de acción similar. Esta situación ha llevado a la necesidad de la adopción de medidas urgentes, entre las que está el controlar la presencia de residuos de antibióticos en los alimentos, lo que implica la necesidad de nuevos métodos de tratamiento de muestras que permitan la extracción de los analitos en concentraciones inferiores a los límites máximos de residuo establecidos. Se ha puesto a punto el primer método multiresiduo de análisis de leche de oveja que permite la extracción de antibióticos macrólidos, la limpieza de la matriz y la posterior determinación de los mismos en concentraciones inferiores a las permitidas por la legislación vigente mediante HPLC-DAD, resolviéndose el problema analítico existente para la determinación de antibióticos macrólidos en leche de oveja. Se ha desarrollado y optimizado un nuevo método que permite la extracción cuantitativa de siete antibióticos macrólidos (oleandomicina, eritromicina, roxitromicina, espiramicina, josamicina, tilosina e ivermectina) y la limpieza de las muestras de leche de oveja manchega de forma simultánea, mediante el empleo de la técnica de dispersión de la matriz en una fase sólida (MSPD), utilizando arena lavada como agente dispersante. Es necesaria la eliminación previa de la grasa con hexano. Se ha sintetizado un polímero de impronta molecular (MIP) para eritromicina, mediante polimerización en bloque no covalente con iniciación térmica. El MIP muestra buena selectividad y alta capacidad de adsorción de ERY, y permite también la recuperación de roxitromicina sin mostrar problemas de interferencias. Se ha optimizado un proceso de extracción en fase sólida impresa molecularmente (MISPE) utilizando el MIP previamente sintetizado para ERY. Al aplicarlo a muestras de leche de oveja es necesaria la eliminación previa de proteínas y la eliminación de la grasa con hexano, sirviendo esta etapa como limpieza. Se ha desarrollado un método fiable para la determinación selectiva de eritromicina en muestras de leche de oveja, utilizando el proceso MISPE para la extracción del analito y HPLC-DAD para su cuantificación en concentraciones inferiores al límite requerido por la UE (40 mg·kg-1). Se ha sintetizado y caracterizado un polímero de impronta molecular para espiramicina mediante polimerización en bloque no covalente con iniciación térmica. Sus propiedades de adsorción se han valorado mediante la obtención de las isotermas de adsorción según el modelo de Bi-Langmuir y el análisis de Scatchard, deduciéndose la presencia en el polímero de sitios enlazantes heterogéneos de dos tipos, de alta y baja afinidad. Se ha desarrollado un método para la determinación selectiva de espiramicina en muestras de leche de oveja, utilizando un proceso MISPE para la extracción del analito y HPLC-DAD para su cuantificación en concentraciones inferiores a los límites máximos establecidos por la Comisión Europea.