Desarrollo de técnicas de manipulación genética en eubacterias termófilas del género "Thermus"

Abstract

Hemos construido un gen marcador capaz de conferir resistencia a kanamicina en thermus a 72 grados c., constituyendo el primer marcador de resistencia a antibioticos para bacterias termofilas extremas. Este marcador se ha utilizado para obtener mutantes insercionales en capa s y clonar seis origenes de replicacion distintos procedentes de thermus sp. Y thermus aquaticus. Estos origenes de replicacion han sido utilizados para desarrollar vectores bifuncionales e. Coli-thermus, uno de los cuales ha sido utilizado para desarrollar un vector de expresion y exportacion de proteinas en thermus thermophilus. La utilidad de este vector ha sido demostrada mediante el clonaje, expresion y exportacion en t. Thermophilus y e. Coli del gen que codifica para la celulasa a (cela) de clostridium thermocellum. Hemos desarrollado un vector para el clonaje de promotores directamente en thermus aunque su eficiencia se encuentra limitada por la carencia de un segundo marcador de seleccion. El marcador de seleccion puede ademas ser utilizado para realizar mutagenesis dirigida de cualquier gen de thermus previamente clonado.