Caracterización molecular y funcional de la línea celular ok como modelo para el estudio de la reabsorción renal de fósforo inorgánico

Resumen

MAP17 (Membrane associated protein 17 Kda) es una pequeña proteína de membrana que se identificó sobreexpresada en varios carcinomas de tejidos epiteliales (colón, pulmón y mama). La principal expresión fisiológica de MAP17 se concentra en el túbulo contorneado proximal del riñón. Todavía no ha sido posible determinar la función fisiológica de esta proteína, aunque estudios recientes han implicado a MAP17 en la regulación del transportador renal de fosfato, NaPi-IIa. Esta implicación en el control de la actividad del transportador está vinculada a la formación de complejos macromoleculares a través de la interacción con proteínas PDZ, los miembros de la familia NHERF (NHERF1-4). Estas cuatro proteínas interaccionan tanto con MAP17 como con NaPi-IIa, a través de un motivo de unión a dominios PDZ localizado en el extremo carboxilo de ambas proteínas. La coexpresión de MAP17 con la proteína NHERF3 (o NHERF4) en la línea celular OK, inducía un proceso de internalización del transportador de fosfato desde la membrana apical hacia el aparato de Golgi, provocando una disminución de la actividad de transporte de fosfato. Este efecto no se producía con las proteínas NHERF1 y 2. El trabajo realizado en esta tesis doctoral pretendía ser una continuación de los estudios que han relacionado a las proteínas PDZ y a MAP17 con la regulación del transportador de fosfato, NaPi-IIa, en el túbulo renal. Para eso, estudiamos las posibles interacciones entre MAP17 y otras proteínas PDZ que se expresan en el túbulo proximal: PIST/CAL y Shank2E. Determinamos que ambas proteínas PDZ interaccionaban con MAP17 mediante técnicas bioquímicas in vitro. Además, observamos que la co-expresión de Shank2E con MAP17 inducía un cambio en el patrón de expresión de la proteína PDZ, que ahora aparecía en el aparato de Golgi. La proteína PDZ PIST, por otro lado, parecía interaccionar también con el transportador NaPi-IIa. Puesto que la co-expresión de