Análisis de la expresión y función de app durante la retinogénesis del pollo

Resumen

En este trabajo hemos querido analizar la función de APP tratando de producir una subexpresión de la misma en la retina del embrión de pollo. Para ello se optó primero por utilizar un anticuerpo anti APP, el cual no fue efectivo. Posteriormente se optó por inyectar e introducir, con la técnica de electroporación, un morfolino que, tras unirse al mRNA, frenó su traducción, inhibiendo así la expresión de la APP. Los efectos del anticuerpo y morfolino se han analizado mediante técnicas de biología molecular, morfológicas e inmunológicas; como RT-PCR, Western Blot, técnicas inmunohistoquímicas y TUNEL. El knock-down o subexpresión de APP con el morfolino ha afectado a las células ganglionares retinianas, provocando una mayor proporción de muerte celular que en situación fisiológica, afectando a su vez al proceso de formación, migración, diferenciación y establecimiento de conexiones de las mismas, lo que nos indica que la APP juega un papel importante en el desarrollo de la retina en el embrión de pollo. Analizado la expresión de la APP y del péptido b-amiloide en secciones de la retina del embrión de pollo se puede asegurar que APP está presente desde los estadíos más tempranos. Mientras que el péptido b-amiloide 42 es posible detectarlo a partir del día 9 (E9) y el b-amiloide 40 a partir del día 13 (E13), unos días antes de lo que ya habíamos apreciado con la técnica de ELISA. Los trabajos realizados en esta tesis sugieren que la proteína APP tiene una relevancia fisiológica en la retina del embrión de pollo durante todo su desarrollo.