Inmunosensores y aptasensores electroquímicos nanoestructurados para la determinación de ocratoxina A y proteína C-reactiva

Abstract

En esta tesis doctoral se ha llevado a cabo el diseño, desarrollo y validación de diferentes biosensores de afinidad electroquímicos. Los analitos en los que se ha centrado el estudio han sido la ocratoxina A (OTA) y la proteína C-reactiva (CRP). Se han estudiado diferentes tipos de inmunoensayos, tanto competitivos directos como indirectos, así como ensayos tipo sandwich para el caso de la molécula de CRP. Como elementos de bioreconocimiento selectivo y específico se han utilizado anticuerpos (monoclonales y policlonales) y aptámeros (secuencias de DNA o RNA). Ambos analitos tienen una gran importancia tanto a nivel toxicológico como clínico respectivamente, de ahí el interés de su determinación analítica mediante una metodología analítica sencilla, rápida y portable. El objetivo principal de este trabajo de investigación ha sido el desarrollo de un sistema portable electroanalítico para poder llevar a cabo la determinación in situ de los mencionados analitos y con la necesidad de pequeños volúmenes. En todos los casos se ha trabajado con electrodos serigrafiados de carbono como superficie sensora, donde tiene lugar la etapa de transducción voltamétrica mediante la técnica de voltametría de pulsos diferenciales (DPV). Dichos electrodos fueron previamente fabricados y optimizados, para su posterior aplicación en el campo de los biosensores de afinidad. Dadas las ventajas de la nanoestructuración sobre la superficie sensora, en último término se ha trabajado sobre nanopartículas magnéticas. Sobre ellas se han completado las diferentes etapas de inmovilización, incubación, competición y finalmente la detección electroquímica. Se ha conseguido optimizar y validar varios formatos de inmunosensores y aptasensores que presentan unas propiedades analíticas adecuadas conforme a los límites máximos permitidos (en el caso de la OTA) y adecuadas para un diagnóstico rápido y precoz (en el caso de la CRP).