Papel del factor nuclear nf-kb en los efectos del lps sobre el intestino del conejo

Resumen

El lipopolisacárido (LPS), endotoxina de las bacterias Gram negativas, provoca disfunción de la motilidad intestinal asociada a la sepsis. Los objetivos del presente trabajo experimental fueron: (1) Estudiar el efecto del AAPH sobre: la motilidad intestinal de duodeno de conejo, los niveles del estrés oxidativo, y el papel de los canales de K+ en el mismo; (2) Estudiar la participación del NF-KB en los efectos inducidos por el LPS sobre la contractilidad duodenal del conejo, el nivel del estrés oxidativo en plasma y capa muscular, así como la expresión del NF-KB y de las citocinas liberadas. En la primera parte del estudio la contractilidad duodenal se estudió con la técnica de baño de órganos. El 2, 2'-azobis (2-amidinopropano) dihidrocloruro (AAPH) provocó una disminución en las contracciones espontáneas en el músculo liso de duodeno de conejo, producto de la hiperpolarización producida mediante la activación de los canales de K+ rectificadores de entrada y activados por Ca2+ de intermedia y alta conductancia. En la segunda parte del estudio los animales se dividieron en grupos a los que se inyectaron intravenosamente: a) solución salina, grupo control; b) LPS, animales tratados; c) inhibidores del NF-KB (sulfasalazina, PDTC y RO 106-9920); d) inhibidores del NF-KB más LPS. La contractilidad del duodeno se estudió con la técnica de baño de órganos. El daño oxidativo se cuantificó mediante los carbonilos y malondialdehído (MDA) + 4-hidroxialquenales (4-HDA) en plasma y en la capa muscular del duodeno. La expresión del NF-KB se examinó mediante la técnica de western blotting, y la expresión de las citocinas mediante técnicas de RT-PCR. El LPS redujo las contracciones inducidas por ACh y los inhibidores del NF-KB revirtieron este efecto; activó al NF-KB en el citoplasma y la translocación al núcleo en las células de la capa muscular lisa duodenal; incrementó la expresión de ARNm de IL-6 y TNF-¿, pero no de IL-1ß, IL-8 o IL-10, en la capa de músculo liso duodenal y el inhibidor del NF-KB sulfasalazina, pero no el PDTC o el RO 106-9920, revirtió este efecto; incrementó los niveles de MDA + 4-HDA y carbonilos en el plasma pero no en la capa muscular, siendo luego revertidos por los inhibidores del NF-KB. De estos resultados se puede concluir que LPS disminuye la contractilidad duodenal y el NF-kB es un factor de transcripción clave en la mediación de estos efectos, ya que induce la activación, la translocación y la unión al ADN del NF-kB en la capa muscular duodenal, incrementa los niveles de especies reactivas de oxígeno en el plasma y la expresión de la IL-6 y TNF-¿ en la capa muscular.