Caracterización de la nucleoporina nup88 durante la respuesta osmótica en la médula interna del riñón

Resumo

LAS CELULAS DE LA MEDULA INTERNA DEL RIÑON ESTAN SOMETIDAS A CAMBIOS EXTREMOS EN LA TONICIDAD DEL MEDIO QUE LAS RODEA. ESTAS CELULAS POSEEN MECANISMOS ESPECIFICOS DE ADAPTACION Y SUPERVIVENCIA A HIPERTONICIDAD, QUE SON NECESARIAS PARA UN CORRECTO MECANISMO CONCENTRADOR DE LA ORINA. ENTRE ESTOS CAMBIOS SE INCLUYEN DIFERENCIAS EN LA EXPRESION GENOMICA Y PROTEOMICA. EN LA PRESENTE TESIS SE HA EMPLEADO TECNOLOGIA DE CHIP DE ANTICUERPOS PARA IDENTIFICAR PROTEINAS CUYA EXPRESION ESTA AUMENTADA FRENTE A ESTRES HIPERTONICO EN CELULAS DE LA MEDULA INTERNA DEL RIÑON DE RATON (IMCD3). uNA DE LAS PROTEINAS QUE DEMOSTRO MAYOR EXPRESION FRENTE A ESTRES HIPERTONICO FUE LA NUCLEOPORINA Nup88. LOS CAMBIOS EN LA EXPRESION DE Nup88 FUERON CONFIRMADOS MEDIANTE PCR CUANTITATIVA (PARA EL ARN MENSAJERO) Y WESTERN BLOT (PARA LA PROTEINA). EN TEJIDOS DE RIÑON DE RATON Y DE HUMANO SE ENCONTRO QUE Nup88 ESTA EXPRESADA EN LA MEDULA INTERNA (TEJIDO HIPERTONICO) Y NO EN LA CORTEZA (TEJIDO ISOTONICO). LA EXPRESION EN LA MEDULA RENAL ES SIGNIFICATIVAMENTE MAS ALTA EN RATONES A LOS QUE SE LES RESTRINGIO EL ACCESO AL AGUA DE BEBIDA. PARA CONOCER LA FUNCION DE Nup88 EN LA RESPUESTA OSMOTICA, SE CLONO EL FACTOR DE TRANSCRIPCION ASOCIADO A HIPERTONICIDAD TonEBP EN FRENTE DE LA PROTEINA FLUORESCENTE VERDE (GFP). EN CELULAS IMCD3, SE SILENCIO LA EXPRESION DE Nup88 Y SE TRANSFECTARON LAS MISMAS CELULAS CON LA CONSTRUCCION TonEBP-GFP, LO CUAL RESULTO EN UNA DISMINUCION EN LA SUPERVIVENCIA DE ESTAS CELULAS EN CONDICIONES DE HIPERTONICIDAD DEBIDO A UNA INCORRECTA LOCALIZACION DE TonEBP EN EL CITOPLASMA. LA AUSENCIA NUCLEAR DE TonEBP CONLLEVO UNA REDUCCION EN LA EXPRESION DE SUS GENES DIANA ESENCIALES PARA LA SUPERVIVENCIA DE LAS CELULAS IMCD3 EN CONDICIONES HIPERTONICAS. EN RESUMEN, LA PRESENTE TESIS CARACTERIZA LA SOBRE-EXPRESION DE Nup88 EN LA MEDULA INTERNA DEL RIÑON, LA CUAL ES NECESARIA PARA RETENER EL FACTOR DE TRANSCRIPCION ASOCIADO A HIPERTONICIDAD, TonEBP EN EL NUCLEO DE ESTAS CELULAS Y GARANTIZAR ASI SU ADAPTACION Y SUPERVIVENCIA A ESTAS CONDICIONES.