Identificación y evaluación clínica de proteínas solubles y exosomales del cáncer de colon activado por endotoxinas de escherichia coli

Resumo

Inflamación y cáncer están interrelacionados durante la carcinogénesis y la diseminación corporal del cáncer y la metástasis. Más aún, numerosas moléculas inflamatorias y patógenos microbianos promueven el desarrollo de tumores experimentales, habiéndose demostrado una asociación entre la respuesta transcripcional que el lipopolisacárido (LPS) activa a través de TLR4 y la vía NFκB, y los mecanismos moleculares de carcinogénesis y metástasis. Sin embargo, por el momento se desconoce la naturaleza y expresión de los factores solubles y exosomales vinculados a la respuesta tumoral al LPS y sus posibles correlaciones con la transcripción de genes prometastásicos. El presente trabajo se planteó con dos objetivos: 1) estudiar la respuesta funcional de células en cultivo del CCR humano a las endotoxinas de LPS a través de la identificación de moléculas dependientes de LPS en su secretoma mediante métodos de proteómica; y 2) analizar la expresión génica de las moléculas del CCR dependientes de LPS y su posible asociación a genes prometastásicos conocidos. Los resultados obtenidos demostraron que la acción del LPS sobre la línea HT-29 de CCR humano indujo una respuesta transcripcional y secretora de citocinas que imitó a la de los monocitos activados por LPS. El estudio mediante 2D-PAGE y espectrometría de masas del sobrenadante de las células HT-29 identificó 16 moléculas solubles específicas de la respuesta a LPS, mostrando muchas de ellas un aumento de expresión génica en la lesión tumoral frente a mucosa normal de pacientes con CCR, y una interrelación con genes prometastásicos. Más aún, se identificaron subgrupos de pacientes en los que la naturaleza funcional de genes prometastásicos y dependientes de LPS fue distinta. Por último, al estudiar el secretoma de HT-29 junto con el de otras cinco líneas celulares más de CCR humano, mediante cromatografía líquida y espectrometría de masas, se demostró que con independencia de la expresión de TLR4 y de la translocación nuclear de p65 en respuesta a LPS, las proteínas LPS-dependientes fueron mayoritariamente de tipo exosomal, estando un 10% asociadas por trabajos previos a la metástasis hepática del CCR. Por tanto, la respuesta del CCR a LPS conlleva la secreción de proteínas solubles y especialmente exosomales, cuya expresión de sus genes se asocia a la de otros conocidos por sus implicaciones prometastásicas.