Estudios estructurales de los fragmentos amino terminal de los canales de potasio shaker b nativo (shb) y mutado (shbl7e)

Resumen

Existen diversos tipos de canales iónicos de Na+ y K+ dependientes de voltaje que presentan un mecanismo de inactivacion rapida que supone la oclusion de la boca interna del canal por un dominio citoplasmico flexible de al menosuna de las subunidades de canal. Este mecanismo se denomina de ""bola y cadena"". En el año 1990 se pone de manifiesto que los 20 primeros aminoacidos de la region N-terminal de cada una de las subunidades del canal nativo(NH2-MAAVAGLYGLEDRQHRQQQ) forman la llamada ""Bola"", que añadida libre al lado citoplasmico permite recuperar la inactivacion rapida en canales que por carecer del dominio N-terminal no la poseen. Sustituciones en la mitad N-terminal del peptido bola de aminoacidos hidrofobicos por otros, cargados, por ejemplo L7E, suponen la perdida de la capacidad inactivante del peptido resultante. En el trabajo que se presenta en esta tesis se utilizan los peptidos sinteticos ShB (inactivante) y Sh+BL7E(no inactivante) para estudiar su interacción con vesiculas lipidicas amionicas, por contener estas una superficie cargada negativamente y un medio hidrofobico que simulan los elementos estructurales presentes en la region del canal a la que se unen el peptido inactivamente. La interacción peptido-diana modelo supone una primera etapa del anclaje de la mitad c-terminal cationica del peptido con la superficie anionica de los liposomas por fuerzas electrostaticas, despues ocurre la estructuracion en horquilla beta de la porcion N-terminal del peptido y finalmente tiene lugar la insercion de esta mitad N-terminal en el dominio hidrofobico de la bicapa. El peptido ShiB se inserta en la bicapa amionica como monomero y a una profundidad suficiente como para afectar a ambas hemicapas. Por otra parte, la derivatizacion del peptido ShB con una sonda fotoactivable llamada ASIB convierte al peptido resultante en un analogo estructural y funcional con el cual explorar el sitio en el canal al que se une la ""bola inactiva