Función de c3g en la regulación del crecimiento y progresión tumoral en hepatocarcinoma. Implicación en la ruta de señalización de hgf/met

Resumen

El hepatocarcinoma (HCC) es la cuarta causa de muerte por cáncer. C3G es un factor que activa el intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) de GTPasas de la superfamilia de Ras, principalmente, Rap1 y R-Ras, aunque puede actuar independientemente de su función como GEF a través de la interacción con otras proteínas. C3G es esencial para el desarrollo embrionario y regula numerosas funciones celulares como motilidad, adhesión o muerte. Su función en cáncer es controvertida y puede actuar tanto como supresor o promotor tumoral o ambos. Sin embargo, no hay datos disponibles en la literatura sobre el posible papel de C3G en HCC. Numerosas alteraciones genéticas han sido descritas en HCC, siendo frecuente la sobreexpresión de Met, el receptor de HGF. A su vez, C3G ha sido implicado en la vía de señalización de HGF/Met, pero, en ningún caso, en células de HCC. En base a esto, el principal objetivo de esta Tesis es analizar el papel de C3G en el crecimiento, progresión, diseminación y generación de metástasis en HCC, usando diferentes modelos humanos y murinos para identificar los mecanismos implicados. El análisis de la información de bases de datos públicas mostró que la expresión del RNAm de C3G era más elevada en muestras de tumores de pacientes de HCC que en hígados sanos control. A su vez, los niveles proteicos de C3G también eran altos en las líneas celulares humanas de HCC y en dos modelos murinos de HCC, inducidos por tratamiento con DEN o por sobreexpresión de Met en hepatocitos. Además, los altos niveles de RNAm de C3G se correlacionaban positivamente con la progresión del HCC y mal pronóstico. Asimismo, se identificaron mutaciones en el gen de C3G en pacientes de HCC, asociadas a una menor supervivencia. El silenciamiento estable de C3G en líneas celulares de HCC humanas (Hep3B y HLE) y de ratón (mHCC1) disminuía las propiedades pro-tumorigénicas. Las células silenciadas de HCC mostraban una menor adhesión y supervivencia en condiciones no adherentes y una mayor capacidad migratoria e invasiva. Además, estas células con silenciamiento de C3G expresaban altos niveles de marcadores mesenquimales y factores de transcripción implicados en la transición epitelio-mesénquima (EMT), similares a los inducidos por el tratamiento con TGFbeta-1 en células no silenciadas. Por tanto, niveles bajos de C3G inducirían un proceso de tipo EMT. A su vez, los tumores generados mediante xenotransplantes heterotópicos de células Hep3B con y sin silenciamiento de C3G en ratones inmunodeprimidos, mostraron que la disminución en los niveles de C3G reducía el crecimiento tumoral in vivo, al incrementar la apoptosis y disminuir la proliferación de las células de HCC. Además, había un mayor número de células tumorales diseminadas en la médula ósea en los ratones con tumores generados por las células de HCC con silenciamiento de C3G. A su vez, en ensayos de xenotransplante con líneas celulares murinas mHCC que sobreexpresan Met, encontramos que los niveles de C3G en estas líneas se correlacionaban inversamente con la generación y tamaño de las metástasis de pulmón. Sin embargo, los niveles proteicos de C3G eran mayores en las metástasis de pulmón que en el tumor primario, y los niveles de RNAm de C3G en pacientes de HCC con metástasis en pulmón según el análisis de bases de datos públicas. Esto sugiere que C3G podría favorecer el crecimiento de las metástasis de pulmón. Finalmente, detectamos que la activación de Met, y las rutas de señalización activadas por Met en respuesta a HGF se reducían mucho en células Hep3B con silenciamiento de C3G, indicando una activación defectiva de la ruta de señalización de HGF/Met. Además, se demostró la existencia de una interacción entre Met activado, Gab1 y C3G, independiente de CrkL. En conclusión, C3G es una nueva pieza clave en el HCC que promueve el crecimiento y progresión tumoral y podría considerarse como un nuevo potencial biomarcador de mal pronóstico en pacientes de HCC.