Desarrollo de inmunosensores en flujo aplicados a la determinacion de residuos de plaguicidas

Resumen

El análisis de plaguicidas en muestras de interés medioambiental requiere el uso de técnicas analíticas sensibles y selectivas. Los métodos actuales, tanto los oficiales cromatográficos como los EIA, son muy adecuados para la resolución de un gran número de problemas, pero son difícilmente aplicables al análisis en línea o en continuo. En este sentido, se ha puesto a punto una tecnología para el desarrollo de inmunosensores para plaguicidas. Los inmunosensores desarrollados operan en fase heterogénea con detección fluorimétrica, y emplean formatos de ensayo competitivos utilizando reactivos marcados con la enzima peroxidasa, en un sistema en flujo secuencial totalmente automatizado. Utilizando diferentes tipos de soporte particulado (gel de agarosa, vidrio de poro controlado y un polímero con proteína A/G inmovilizada), se han puesto a punto tres protocolos de ensayo competitivo: el formato competitivo directo, que emplea un anticuerpo específico inmovilizado orientadamente mediante enlace covalente sobre el soporte; el formato competitivo indirecto, que utiliza un hapteno competidor inmovilizado; y un formato alternativo denominado de captura de inmunocomplejo, en el que la reacción de competición entre el anticuerpo, el analito y el trazador enzimático se establece en disolución y los inmunocomplejos formados son capturados por la proteína A/G inmovilizada. El formato de ensayo que se ha mostrado más adecuado ha sido el formato de captura, en lo que hace referencia a sensibilidad, reusabilidad de la inmunosuperficie, y versatilidad, mientras que el formato indirecto ha sido el de peores prestaciones. Los sistemas desarrollados se han aplicado, empleando anticuerpos monoclonales y policlonales, al análisis de los plaguicidas carbaril, atrazina e irgarol, así como al metabolito 3,5,6-tricloro-2-piridinol, en distintos tipos de aguas, tanto nativas como reforzadas, entre los que se encuentran agua pota