Plasticidad de los progenitores hematopoyéticos del timo humano desarrollo de sistemas de modificación genética para el estudio de la diversificación de linajes celulares

Resumen

En este trabajo de Tesis se ha caracterizado la potencialidad de los progenitores hematopoyéticos del timo humano, habiéndose determinado que los precursores más tempranos presentes en el timo postnatal humano (CD34++ CD33 lo) no están restringidos al linaje linfoide sino que poseen la capacidad de generar células del linaje mieloide (monocitos y ganulocitos) además de células NK, DCs, y células T. Por otra parte, se ha identificado un nuevo subtipo de células dendrítcas con características mieloides (DC1) en el timo postnatal humano. Los estudios desarrollados han permitido determinar que los progenitores más tempranos del timo humano, CD34++ CD33lo, generan dos progenitores intermediarios independientes que definen dos vías alternativas de diferenciación intratímica: linfoide y mieloide. Los progenitores CD34lo CD34lo, que se caracterizan por la expresión de IL-7Ralfa, bajos niveles de GM-CSFRalfa y altos niveles de pTalfa, son progenitores proT/NK sin capacidad para generar células CD1 ni mielomonocitos. Por otra parte, los progenitores CD34lo CD44++, que expresan GM-CSFRalfa, así como bajos niveles de IL-7Ralfa y de pTalfa, son progenitores de células CD1, células NK y mielomonocitos sin capacidad para generar células T. La maduración de células DC1 intratímicas ocurre exclusivamente a través del progenitor CD34lo CD44++, que genera a su vez dos precursores inmediatos de células DC1: monocitos CD14+CD1a- y progenitores pre-DC1 CD14- CD1a+. Con objeto de disponer de una tecnología adecuada para la manipulación genética de los progenitores hematopoyéticos humanos, se han desarrollado modelos experimentales para la transducción retroviral de precursores de timo humano con vectores retrovirales portadores del gen marcador GFP. Se ha corroborado que los protocolos establecidos no interfieren con los procesos de diferenciación de los precursores transducidos, ni con la funcionalidad de las células maduras