Caracterización de miR-127 como nuevo mediador de la fibrosis renal

Resumen

Está establecido que una gran parte de los pacientes que superan un Fracaso Renal Agudo (FRA) terminan por desarrollar Enfermedad Renal Crónica (ERC) a largo plazo. En relación con esta progresión, no hay disponibles en clínica biomarcadores cuantificables y precisos, que permitan hacer un seguimiento de estos pacientes y detectar en estadíos tempranos la ERC. De hecho y debido a la ausencia de biomarcadores, estos pacientes no han sido considerados de riesgo y normalmente no son sometidos a seguimiento exhaustivo. Este trabajo se basa en resultados previos de nuestro grupo que ha identificado y patentado una combinación de miRNAs con capacidad diagnóstica de FRA en sueros de pacientes. Algunos de estos miRNAs permanecían alterados tras la resolución de FRA y por tanto valoramos su papel en el desarrollo de daño crónico, proponiendo como objetivo final identificar y validar miR- 127, uno de los miRNAs que permanecen alterados, como un nuevo biomarcador pronóstico, diagnóstico e incluso como una nueva opción terapéutica de ERC. Para ello se han usado modelos experimentales in vitro (células epiteliales tubulares humanas y fibroblastos de rata), el modelo murino de Obstrucción Ureteral Unilateral (OUU) y biopsias y muestras de suero de pacientes con ERC establecida en distintos estadios. El principal estímulo fibrótico descrito es TGF-β, que a través de la cascada de señalización TGF-β/ Smad promueve la supervivencia y proliferación de fibroblastos, induce transición epitelio-mesénquima (TEM) de las células epiteliales, y permite el depósito y remodelado de la matriz extracelular (MEC), mediante la modulación de metaloproteinasas. Por ello, hemos utilizado en este trabajo un modelo de células epiteliales HK-2 tratadas con TGF-β. Como características fundamentales de la disfunción epitelial que contribuye a la fibrosis del riñón, observamos en células epiteliales tubulares proximales: pérdida de expresión de E-Cadherina, incremento de la expresión de α-SMA, depósito de matriz extracelular como colágeno I y activación de metaloproteinasas (MMP- 9 y 13). Todo ello es determinado en cultivos celulares de HK-2 tratados con TGF-β. En los fibroblastos estudiamos la implicación de este miRNA en su activación y proliferación. Para estudiar el papel del miR-127-3p en este contexto, se modula in vitro, mediante la transfección de pre-miRs y anti-miRs. Además, se determinan los niveles de los miRNAs de la combinación en el suero de pacientes, mediante qRT-PCR y se establecen correlaciones estadísticas con los datos clínicos de los mismos. Todo lo mencionado previamente, nos lleva a caracterizar miR-127-3p como mediador de fibrosis renal y a proponerlo como biomarcador de ERC.