Caracterización de células mesenquimales caninas obtenidas de tejido adiposoterapia con células alogénicas en heridas agudas y crónicas

Resumen

Las células madre mesenquimales (MSCs) son células con capacidad multipotente, de morfología fibroblastoide, capaces de auto renovarse y de diferenciarse en múltiples linajes celulares, siendo capaces de reparar y reemplazar células dañadas, lo cual les confiere un importante potencial terapéutico. El perro permite desarrollar protocolos en medicina regenerativa que posteriormente puedan trasladarse a humanos. El objetivo de esta Tesis Doctoral ha sido utilizar MSCs alogénicas caninas en terapias celulares, en heridas cutáneas agudas y crónicas, para determinar la celeridad y eficacia del tratamiento. En este Trabajo hemos realizado un estudio comparativo que analiza los procesos de proliferación, los marcadores de superficie y los genes de expresión OCT-4, SOX9, RUNX2, PPAR¿ en células MSC de médula ósea (BMMSCs) y tejido adiposo (ASCs). Se analizó el papel del factor estimulante de células madre (SCF) en la secreción de metaloproteinasas MMP-2, y MMP-9 en ASCs. Asimismo, se estudió la capacidad de diferenciación de las ASCs a tejido adiposo, óseo y cartilaginoso y la expresión de los factores de transcripción específicos. El papel inmunomodulador de las ASCs se evidenció al cocultivar células mononucleares de sangre periférica con ASCs. En el ensayo piloto se observó que el tratamiento con ASCs promovió de manera eficaz la regeneración epidérmica y dérmica en comparación con el tratamiento convencional. Estos resultados permitieron el abordaje del tratamiento celular en una población de 24 perros con heridas agudas y crónicas. La contracción y reepitelización fue significativamente diferente entre heridas tratadas con ASCs alogénicas y heridas con tratamiento convencional; esta diferencia se observó tanto en heridas agudas como crónicas. A los 90 días, la reepitelización de ambos tipos de heridas, alcanzó más del 97%. El estudio histopatológico reveló la regeneración epidérmica y dérmica. Por otro lado, el tratamiento con células ASCs origino una ¿up-regulation¿ del factor de crecimiento de granulocitos (GM-CSF) a nivel genético. CONCLUSIONES 1. Nuestros resultados respaldan la posibilidad de utilizar MSCs derivadas del tejido adiposo canino para terapia celular ya que estas células poseen características y cualidades esenciales para ello, debido a que cumplen las características definidas por la Sociedad Internacional para Terapia Celular y tienen capacidad de migrar. 2.- Los resultados obtenidos del protocolo piloto con terapia celular alogénica, nos permite abordar con seguridad y eficacia el tratamiento en pacientes con heridas cutáneas, hecho que está respaldado por los hallazgos histopatológicos, y la ausencia de rechazo del injerto, debido al efecto inmunomodulador de las ASCs. 3.- Los resultados obtenidos en pacientes con heridas cutáneas agudas y crónicas después de utilizar una terapia celular alogénica, nos indican el éxito de esta terapia ya que: Proporciona una curación y reepitelización de heridas más rápida que la obtenida con otros tratamientos convencionales. Observándose que a los 90 días pos tratamiento, la reepitelización de heridas agudas y crónicas alcanza más del 97%. El estudio histopatológico reveló una reducción en el infiltrado inflamatorio y la presencia de múltiples folículos capilares el día 7 después del tratamiento con ASCs, promoviendo la regeneración epidérmica y dérmica en heridas agudas. No se manifiesta el síndrome de respuesta inflamatoria sistémica a lo largo de los treinta días postratamiento; este hecho, junto con la capacidad inmunomoduladora de estas células, nos permite concluir la seguridad de nuestro protocolo. El incremento en la transmigración celular debido a factores de crecimiento junto con el aumento de los niveles de expresión génica del GM-CSF en heridas agudas tratadas, permiten procesos paracrinos capaces de contribuir al reclutamiento de células y a la inducción de factores secundarios que participan en la reparación de la piel en el sitio de la lesión.