Estudio de los genes sig1 y sybA regulados por el factor de transcripción SrfA en Dicyostelium discoideum

Resumen

El factor de transcripción SRF ("Serum Response Factor", Factor de respuesta a suero) juega%&/un papel importante durante la diferenciación y la proliferación de muchos organismos. El gen ortólogo%&/a SRF en Dictyostelium discoideum, srfA, es imprescindible para la migración de los "slugs"y para la%&/correcta maduración de las esporas. srfA muestra un patrón de expresión complejo a lo largo del desarrollo%&/debido al uso de promotores alternativos. Se ha estudiado la función de las distintas zonas promotoras en%&/el ciclo de vida de Dictyostelium. La expresión de srfA dirigida por el promotor P2 fue capaz de recuperar%&/la migración y la morfología de los "slugs" de la cepa srfA-. Por otro lado, la expresión bajo el control del%&/conjunto de promotores P3+P4 rescató el fenotipo de esporulación asociado a la cepa srfA-.%&/El uso de una genoteca diferencial y de Microarrays, ha permitido identificar genes cuya%&/expresión es dependiente de SrfA en "slug" y estadios finales del desarrollo. sig1 y sybA se seleccionaron%&/para un estudio más detallado.%&/El gen sig1 (SrfA Induced Gene 1) mostró una disminución de los niveles de mRNA en la cepa%&/srfA- frente a la cepa control, en el estadio de "slug". Este gen codifica una pequeña proteína de 89%&/aminoácidos, y presenta una alta identidad con otros doce genes del cromosoma 2. Estos 13 genes se%&/encuentran asociados en dos grupos denominados Grupo 1 y Grupo 2. La expresión de estos genes ha sido%&/estudiada por RT-PCR usando oligonucleótidos específicos para cada grupo. Ambos grupos mostraron una%&/fuerte inducción entre las 10 y las 12 horas de desarrollo. Se ha abordado el estudio de su función mediante%&/la utilización de anticuerpos y la generación de cepas KO, de sobre-expresión y RNAi. La inhibición del%&/desarrollo por anticuerpos específicos contra las proteínas de los genes del Grupo 2, sugieren un papel en el%&/mantenimiento y progresión del estadio de "mound".%&/sybA (Synaptobrevin A) homólogo al gen humano sinaptobrevina, muestra una expresión%&/dependiente de SrfA en estadios finales del desarrollo. No se han podido generar cepas Knock-Out o de%&/RNAi para estudiar la función de este gen. Células donde se sobre-expresa el gen sybA muestran defectos%&/de crecimiento en HL5 (con tiempos de generación de entre 14-16 horas) y unos niveles reducidos de%&/fagocitosis y exocitosis. La expresión de proteínas quiméricas GFP-SybA muestran una localización de la%&/proteína en pequeñas vesículas inmóviles en la periferia de la célula. Marcadores específicos para lisosomas,%&/Golgi, retículo y macropinosomas, no co-localizan con la proteína GFP-SybA en ninguno de los estadios%&/del tráfico vesicular analizados.