Papel del TLR4 plaquetario en el ictus

Zusammenfassung

El ictus afecta a más de 15 millones de personas cada año. Actualmente sólo existe un tratamiento farmacológico aprobado: el t-PA (tissue-Plasminogen Activator por sus siglas en inglés). Sin embargo, este tratamiento tiene grandes inconvenientes, entre ellos, la baja incidencia de reperfusión. Actualmente se desconocen las causas de la noreperfusión, pero se cree que la composición del trombo juega un papel importante. La composición del trombo ha sido de interés para la comunidad científica durante la última década, siendo los NETs (Neutrophil Extracellular Traps por sus siglas en inglés) el último componente en ser identificado. La NETosis es un mecanismo celular del neutrófilo caracterizado por la liberación del ADN extracelular en respuesta a infecciones microbianas siendo el TLR4 de la plaqueta esencial para su producción en el fenómeno de septicemia. Hoy en día, además, se ha descrito su papel en el fenómeno de la inmunotrombosis, siendo el NET el responsable de impedir la diseminación de la infección bacteriana mediante la formación de trombos (Gardiner & Andrews, 2012; Laridan et al., 2017). Por otro lado, tras un ictus se produce una respuesta inflamatoria caracterizada por la infiltración de células sanguíneas, entre ellas el neutrófilo y la plaqueta, que va a desencadenar la activación de procesos inflamatorios y trombóticos que podrían estar mediados por los NETs; de hecho, se ha demostrado la presencia de altos niveles de marcadores de NETs en sangre de pacientes de ictus (Valles et al., 2017) A partir de estos antecedentes, proponemos como hipótesis de trabajo que los NETs están implicados en procesos trombóticos e inflamatorios tras un ictus experimental influyendo en su pronóstico, siendo además la NETosis, un proceso dependiente del TLR4 de la plaqueta. Los resultados obtenidos en esta Tesis doctoral demuestran que los trombos de naturaleza plaquetaria son resistentes a la lisis por tPA, mientras que aquellos de alto contenido en fibrina son lisados por dicho fibrinolítico. Por otro lado, se ha demostrado que la administración tardía de DNasa-I degrada los NETs que aparecen en el tejido cerebral tras isquemia y produce una reperfusión eficaz en trombos ricos en plaquetas, aunque no parece producirse en la trombosis de naturaleza fibrinoide, datos corroborados con el inhibidor de la formación de NETs, la Cl-amidina. Además, hemos demostrado que la DNasa-I tiene un papel neuroprotector independiente de la reperfusión, manteniendo además la integridad de la barrera hematoencefálica. Este proceso de NETosis dependiente de la naturaleza del trombo, también se produce en trombos humanos, de tal manera que la eficacia de la DNasa-I en la lisis del trombo es dependiente del contenido plaquetario. Por otro lado, mediante el uso de animales transgénicos se ha demostrado que los NETs se activan por el receptor TLR4 de la plaqueta, no así por el TLR4 de las células con origen mieloide. Por último, los resultados obtenidos respecto al último objetivo planteado en esta Tesis doctoral hacen referencia al estudio del papel de los NETs en la fase aguda del ictus. Los resultados ponen de manifiesto, por primera vez, que la degradación o inhibición de los NETs mediante la administración de DNasa-I o Cl-amidina, respectivamente, tiene un efecto neuroprotector tras isquemia. Además, hemos demostrado que el TLR4 de la plaqueta parece tener un papel en este proceso. En conjunto, nuestros datos apoyan la implicación de los NETs en procesos trombóticos de naturaleza plaquetaria pero no fibrinoide, y que su formación es dependiente del TLR4 plaquetario. Además, la lisis o inhibición de su formación tiene un efecto neuroprotector en la fase aguda del ictus. Estos resultados permiten ampliar el abanico de posibilidades para la prevención y el tratamiento del ictus planteando un posible cambio de escenario en el tratamiento en la fase aguda del ictus, siendo la DNasa-I un posible tratamiento alternativo para los pacientes de ictus.