Congelación convencional y ultra-rápida de espermatozoides de rumiantes silvestresInfluencia de la testosterona y la prolactina en la criorresistencia espermática

Resumen

La limitada efectividad en la criopreservación de espermatozoides en especies de rumiantes silvestres determina que se debe hacer un nuevo enfoque de criobiología espermática para conocer los cambios fisiológicos en los espermatozoides durante el ciclo reproductivo anual. Además, también deben desarrollarse métodos alternativos de criopreservación, como la congelación ultra-rápida. Por otro lado, los cambios en el estado endocrino están relacionados con la estacionalidad de estas especies, lo que podría estar afectando a la criopreservación espermática. La presente tesis doctoral ha abordado la criobiología espermática de estas especies desde diferentes perspectivas, con los objetivos de determinar la eficacia de la congelación ultra-rápida de espermatozoides de rumiantes silvestres como alternativa a la congelación convencional, y evaluar la influencia de diferentes cambios hormonales estacionales en la respuesta de los espermatozoides frente a procesos de criopreservación. El primer objetivo específico se desarrolló mediante el artículo I, con el objeto de determinar si mediante la congelación ultra-rápida se consigue un estado vítreo del medio extracelular, y comparar, mediante técnicas convencionales de análisis espermático y de microscopía electrónica de transmisión y de barrido, el daño causado en los espermatozoides mediante dos métodos de criopreservación: congelación ultra-rápida y convencional. La aplicación de estas técnicas de microscopía, sugirió que el estado vitrificado no se alcanzó mediante la congelación ultra-rápida, y provocó más daño en membrana que la congelación lenta convencional, quizás debido a las características de los cristales de hielo formados extracelularmente. El segundo objetivo específico se llevó a cabo mediante el artículo II, para examinar la eficacia de ambos métodos de criopreservación en espermatozoides epididimarios obtenidos post mortem mediante una técnica de lavado retrógrado. Los resultados mostraron que, a pesar de ejercer un efecto más dañino sobre las variables espermáticas que la congelación convencional, la congelación ultra-rápida puede ser una alternativa útil para la criopreservación de espermatozoides epididimarios para estas especies en condiciones de campo. El tercer objetivo específico se desarrolló mediante el artículo III, para examinar la influencia de los cambios de secreción de testosterona en la criorresistencia espermática, utilizando ambos métodos de criopreservación; en un primer experimento se redujeron los niveles de testosterona usando el anti-andrógeno acetato de ciproterona (CA), y en un segundo experimento los niveles de testosterona se incrementaron mediante la administración de propionato de testosterona (TP). Ambos tratamientos modificaron las concentraciones plasmáticas de testosterona como se esperaba, y los resultados mostraron que las concentraciones circulantes de testosterona parecen influir en la criorresistencia de los espermatozoides. Por último, el cuarto objetivo específico se llevó a cabo a través del artículo IV, con el fin de examinar la influencia de los cambios inducidos en la secreción de prolactina (PRL), en la criorresistencia espermática mediante los mismos métodos de criopreservación; en un primer experimento la secreción PRL fue modificada usando el agonista dopaminérgico bromocriptina (BCR), y en un segundo experimento usando el antagonista domaminérgico D2 sulpirida (SLP). Ambos tratamientos modificaron las concentraciones plasmáticas de PRL y los resultados sugirieron que los altos niveles de PRL afectan negativamente la criorresistencia de los espermatozoides. Los resultados obtenidos en la presente tesis han permitido incrementar los conocimientos sobre criobiología espermática y fisiología reproductiva en los rumiantes silvestres, lo que permitirá la optimización del desarrollo de biotecnologías reproductivas en estas especies.