La aspirina modifica en los megacariocitos las propiedades pre-apoptóticas de las plaquetas de novo

  1. Martínez Martínez , Carlos Hugo
Dirigida por:
  1. José Javier Zamorano Leon Director/a
  2. Antonio López Farré Director

Universidad de defensa: Universidad Complutense de Madrid

Fecha de defensa: 08 de julio de 2021

Tribunal:
  1. M. A. García Fernández Presidente
  2. L. Collado Yurrita Secretario
  3. Juan Carlos Porres Cubero Vocal
  4. Sara González Sánchez Vocal
  5. Pilar Caridad Morata Barrado Vocal
Departamento:
  1. Medicina

Tipo: Tesis

Resumen

El tratamiento crónico con ácido acetilsalicílico (ASA), entre 100-300 mg/día, es primera elección en la prevención de eventos vasculares trombóticos agudos. Sin embargo, las plaquetas no son completamente inhibidas por ASA hasta en un 20% de la población general y un 40% de la población diabética. Este efecto se conoce como síndrome de resistencia plaquetaria a ASA. En la actualidad, no se comprende completamente la etiología y los mecanismos involucrados de este síndrome. Recientemente, se describió que las plaquetas resistentes a ASA mostraban un contenido proteico menor que las plaquetas sensibles a ASA. La plaqueta tiene una capacidad de síntesis proteica muy limitada. Por ello, estas diferencias en el contenido proteico plaquetario entre sensibles y resistentes a ASA debería producirse desde la generación de la palqueta por el megacariocito. La activación plaquetaria depende de la funcionalidad mitrocondrial, que está estrechamente relacionada con la apoptosis celular. El objetivo principal del trabajo fue estudiar si la exposición in vitro de megacariocitos a concentraciones bajas de ASA podía modificar las características apoptóticas de las plaquetas nuevas formadas. El diseño experimental se basó en la estimulación in vitro de células Meg-01 (línea celular megacarioblástica humana), con 10 nmol/L 12-miristato-13-acetato de forbol (PMA), para que generaran plaquetas, en presencia y ausencia de ASA (0,33 mmol/L). Esta concentración de ASA se eligió porque es la observada en el suero de voluntarios sanos tratados con 200 mg/día de ASA. Se analizaron la expresión y/o actividad de diferentes marcadores de apoptosis y funcionalidad mitocondrial en plaquetas generadas en presencia y ausencia de ASA Los resultados evidenciaron la generación de partículas similares a plaquetas (PLPs) a partir de células Meg-01 incubadas con PMA. Las PLPs derivadas de megacariocitos incubados con ASA tenían un mayor contenido de proteínas proapoptóticas Bax y Bak comparadas con las PLPs derivadas de células Meg-01 incubadas sin ASA. Sin embargo, a pesar de mostrar este fenotipo proapoptótico las PLPs formadas desde megacariocitos incubados con ASA en condiciones basales no tenían un contenido diferente de citocromo C citosólico o de actividad caspasa-3 respecto a las PLPs generadas en ausencia de ASA. Tras estimulación de las PLPs con ionóforo de calcio A23187 (10 ¿mol/L), tanto el contenido de citocromo C citosólico como la actividad caspasa-3 fue mayor en las PLPs formadas de novo desde megacariocitos incubados con ASA comparado con PLPs formadas en ausencia de ASA. Además, las PLPs expuestas a ASA mostraron menor actividad citocromo C oxidasa tras incubación con ionóforo de calcio A23187 que las PLPs estimuladas con ionóforo de calcio no expuestas a ASA. La densidad de mitocondrias entre PLPs de megacariocitos expuestos o no a ASA no fue diferente entre los dos grupos de PLPs. El antagonista de L-arginina, inhibidor de la actividad óxido nítrico sintasa 3, (L-NAME, 10-4 mol/L)), redujo la traslocación de la proteína Bak a la mitocondria y la actividad caspasa-3 en PLPs estimuladas por A23187 y generadas en presencia de ASA. Como conclusiones, en condiciones de no estimulación, las PLPs generadas de megacariocitos en presencia o ausencia de ASA no tienen activada la vía intrínseca de la apoptosis, a pesar del fenotipo apoptótico que presentan las PLPs derivados de megacariocitos incubados con ASA. Sin embargo, la estimulación con ionóforo de calcio A23187 de PLPs generadas en presencia de ASA indujo la estimulación de la vía intrínseca de la apoptosis de forma significativamente más evidente que en las PLPs generadas en ausencia de ASA. El óxido nítrico está involucrado en la mayor actividad caspasa-3 y en la traslocación a la mitocondria de la proteína pro-apoptótica Bak en las PLPs de megacariocitos incubados con ASA respecto a los no incubados con ASA