Identificación de biomarcadores asociados a la inflamación alérgica

Zusammenfassung

Durante los últimos años tanto la prevalencia como la gravedad de las enfermedades alérgicas se ha visto aumentada. Además, las características subyacentes al desarrollo de un fenotipo alérgico grave no están bien definidas actualmente y existe una falta de biomarcadores útiles tanto para la clasificación de estos pacientes como de predicción y monitorización de eficacia de tratamientos como la inmunoterapia sublingual. Por otro lado, en los últimos años ha cobrado mucha relevancia el papel de las plaquetas como células clave en la inflamación alérgica, así como la relación entre microbiota y el desarrollo de la alergia, sin embargo, aún no hay estudios suficientes que profundicen en estas cuestiones. Con el fin de indagar en estos aspectos, en este trabajo nos propusimos la evaluación del papel de las plaquetas en el desarrollo y progresión de la alergia en distintos modelos de gravedad respiratoria, con y sin alergia alimentaria asociada mediante un análisis transcriptómico, por otro lado, la caracterización del perfil transcriptómico asociado al tratamiento con inmunoterapia sublingual a Phleum pratense (GRAZAX) y por último, la identificación de cambios en la composición de la microbiota intestinal en un modelo de alergia a la proteína de leche de vaca en lactantes. En cuanto al papel de las plaquetas en la alergia, durante la Fase I del estudio, encontramos una disminución de transcritos asociados a funciones plaquetarias en las CMSP obtenidas de pacientes con alergia respiratoria a gramíneas, sensibilizados a profilina y que llegaban a desarrollar reacciones alimentarias graves en comparación con los sujetos no alérgicos y los pacientes con una alergia respiratoria ligada a alergia alimentaria leve y moderada. Posteriormente, en la Fase II del estudio, nos propusimos validar estos resultados en otro modelo de gravedad alérgica, en este caso de alergia respiratoria a gramíneas en ausencia de alergia alimentaria, centrándonos en la población plaquetaria obtenida mediante un procedimiento de aféresis. Los resultados obtenidos fueron similares a los de la Fase I, los pacientes con una alergia grave mostraban una disminución de transcritos asociados con funciones plaquetarias tales como la agregación y la activación, así como una respuesta inflamatoria disminuida en comparación con los sujetos no alérgicos, sugiriendo un posible agotamiento plaquetario y una alteración en el sistema de reparación. En cuanto al tratamiento con ITSL, se analizó el perfil transcriptómico de los pacientes con alergia a gramíneas incluidos en un estudio aleatorizado doble ciego controlado con placebo a dos años. Los principales resultados obtenidos mostraron que los pacientes tenían un perfil transcriptómico diferente según su sensibilización (monosensibilizados o polisensibilizados) previamente a comenzar al tratamiento. Además, los pacientes monosensibilizados y polisensibilizados que recibían tratamiento activo también mostraban un perfil transcriptómico diferente tras dos años de tratamiento, sugiriendo que su respuesta al tratamiento con ITSL era diferente. Por último, se analizó el perfil transcriptómico de los pacientes monosensibilizados previamente al tratamiento (T0) y tras dos años de ITSL (T2), observándose una desensibilización de las células efectoras a T2, que parece ser clave para la respuesta reguladora que se establece según la mayoría de los estudios a partir del tercer año de tratamiento. Como último objetivo nos propusimos investigar el papel de la microbiota en el desarrollo de la alergia alimentaria, para lo cual utilizamos un modelo de APLV en el que analizamos la composición bacteriana de muestras de heces de lactantes alérgicos, sus madres y sus abuelas y de lactantes control, sus madres y sus abuelas. Por un lado, encontramos que existía una mayor diversidad de la microbiota intestinal en adultos que en lactantes. En cuanto a composición, se encontró una alteración de la familia Prevotellaceae al comparar la microbiota de lactantes alérgicos y lactantes control. Esta diferencia también aparecía al analizar la composición microbiana intestinal de lactantes que se alimentaban con leche de formula (todos lactantes control) con aquellos que tomaban hidrolizado (la mayoría de los lactantes alérgicos), por lo que no podemos saber si es debida a la alergia o a la alimentación ya que existe un sesgo. Por último, quisimos analizar si existía un patrón disbiótico transferido de madres a hijos a lo largo de estas tres generaciones, para lo cual se calculó la distancia de Bray-Curtis en los miembros de la misma familia (madre-lactante, madreabuela, abuela-lactante) y se compararon las familias alérgicas frente a no alérgicas. Las distancias fueron similares por lo que no pudimos concluir que existiese una disbiosis transmitida de madres a hijos en este modelo de APLV.