Avances en cultivo in vitro y transformación genética de ajo (allium sativum l.)

Resumen

La finalidad de este trabajo ha sido establecer un sistema de transformación estable de Allium sativum L. Utilizando el sistema biolístico. Para ello, en este trabajo se desarrollan nuevos sistemas de regeneración in vitro de brotes que se incluyen en el proceso de transformación biolística. Por una parte, se estudia la influencia de la luz y el inhibidor de la biosíntesis de fiberelinas, flurprimidol, sobre un sistema de regeneración continuo, es decir, en el que los explantos no se subcultivan ni se cambian de condición lumínica (fotoperíodo 16/8h u oscuridad) en los dos meses de incubación. Se encuentran diferencias significativas en relación a la formación de callo y a la regeneración de brotes entre las entradas, los medios nutritivos y la condición lumínica utilizadas. En resumen, la luz no afecta a la callogénesis y favorece considerablemente la regeneración de brotes. La entrada Mallorquín produce hasta 250 brotes por gramo de callo producido en el medio que contienen 0,30 mg/l de 2,4-D, 2 mg/l de ANA y 3 mg/l de BAP. Este resultado supera a otros publicados con anterioridad. Por otra parte, se estudian las condiciones de precultivo, bombardeo y selección más adecuadas para obtener expresión estable del gen marcador uidA (gus) en los distintos explantos empleados. Finalmente, se obtienen puntas de raíces, callos y yemas axilares que expresan establemente el gen gus, además de una planta resistente a paromomicina.