Mecanismos patogénicos de las mutaciones en el gen nf1Bases moleculares y celulares

Resumen

La Neurofibromatosis tipo 1 (NF1) es una enfermedad de herencia autosómica dominante con una incidencia de 1/3500 recién nacidos. Se trata de un síndrome neurocutáneo caracterizado por una expresividad muy variable y un riesgo aumentado de desarrollar tumores. La NF1 está causada por mutaciones en el gen NF1 localizado en la región cromosómica 17q11.2, que codifica la neurofibromina, una proteína que regula negativamente la actividad del oncogén Ras. En este trabajo, presentamos un protocolo para el diagnóstico genético-molecular de la enfermedad, basado en el análisis del ADNg y ADNc. Este protocolo presenta una especificidad del 100% y una sensibilidad del 95%. Además, para progresar en el conocimiento de las bases genéticas de la enfermedad, hemos desarrollado diferentes estudios relativos a tres tipos de mutaciones: microdeleciones tipo 1, deleciones/duplicaciones intragénicas y mutaciones de splicing. Las microdeleciones tipo 1 ocurren por recombinación homóloga desigual entre las secuencias parálogas NF1-REPa y NF1-REPc. Hemos encontrado que los cromosomas ¿no deletados¿ de los pacientes con microdeleción tipo 1 presentan un haplotipo mayoritario. Dicho haplotipo está constituido por cinco SNPs localizados en los tres genes distales de la región NF1-REPa - NF1-REPc. Postulamos un modelo para explicar la asociación entre dicho haplotipo y la característica ¿no recombinogénica¿ de los cromosomas investigados. Por otro lado, hemos identificado 18 alelos con variación en el número de copias ¿CNVs- intragénicas y hemos caracterizado a nivel de secuencia nueve de dichas deleciones y una duplicación. El análisis in silico de los puntos de rotura nos ha permitido elaborar un modelo para la formación de varias CNVs. Encontramos que los mecanismos de reparación replicativos son los más frecuentes. Además, hemos identificado diferentes elementos de secuencia implicados en la recombinación. Para el estudio de las mutaciones de splicing hemos realizado diferentes aproximaciones. Evaluamos la utilidad de varios programas in silico para predecir la naturaleza y el efecto sobre el splicing de diferentes cambios puntuales. Además, utilizando minigenes y ensayos in vitro hemos realizado estudios funcionales de las mutaciones para definir los motivos de secuencia (splicing regulatory elements, SRE) y las proteínas, que regulan el splicing de los exones 7 y 37. Los resultados de estos estudios no se limitan a la Neurofibromatosis tipo 1, pues tienen validez y utilidad para entender otras enfermedades genéticas.