"Método de Microscopía Electrónica de Barrido ""block face"" (BFSEM). Estudio con microanálisis por dispersión de energías de Rayos X"

Resumen

Método de Microscopía Electrónica de Barrido ¿block face¿ (BFSEM). Estudio con microanálisis por dispersión de energías de Rayos X. 1.Introducción y objetivos. La técnica Block face Scanning Electron Microscopy consiste en examinar la superficie del bloque de (cara del bloque) , en el que se encuentra incluido un tejido biológico, mediante microscopía de barrido después de realizar cortes ultrafinos para microscopía de transmisión. El objetivo principal de este estudio es el análisis del comportamiento de los metales pesados contrastantes para la observación BFSEM estudiados mediante microanálisis. 2.Desarrollo teórico. En el presente estudio se ha investigado la conducta de las sales de diversos metales pesados como elementos que otorgan contraste a células y tejidos mediante microanálisis de rayos X. Para ello se han diseñado diversos protocolos en los que intervienen dos sustancias clásicas en microscopía electrónica: el tetróxido de osmio y el permanganato potásico. Asimismo, para la determinación de las condiciones óptimas para BFSEM se han utilizado otras herramientas entre las que se encuentran la determinación del varlor de la Signal/noise ratio (SNR), y la técnica de Beam deceleration. 3.Conclusiones. Los mejores resultados se obtuvieron utilizando tetróxido de osmio, los cuales mejoran si además se añaden al osmio metales de elevado número atómico como es el uranio o el wolframio, mostrando estos elementos una mayor afinidad por las estructuras en función de la cantidad de osmio que se haya depositado previamente en ellas. Sin embargo, los tratamientos con permanganato dan resultados aceptables pero de menor calidad que con el osmio. Las técnicas de microanálisis permitieron el estudio de la localización y concentración relativa de los depósitos metálicos en células y tejidos después de contrastar las muestras. La calidad de imagen ha sido determinada en términos de la relación señal/ruido (SNR), observando que cuanto mayor es el depósito de metales pesados en la estructura se obtienen mejores resultados de SNR, lo que concuerda con examen visual de las imágenes. Adicionalmente se han llevado a cabo ensayos aplicando Beam deceleration para mejorar la calidad de las imágenes BFSEM, una estrategia ha dado buenos resultados. Por otro lado se ha investigado la influencia de los recubrimientos conductores sobre la calidad de la imagen, demostrándose que los recubrimientos con platino o carbono son los mejores como así lo demuestran las medidas de SNR. En nuestro trabajo hemos demostrado que podría tener aplicaciones en Histología general y patológica, siendo este último aspecto de gran interés para el diagnóstico histopatológico (Biopsias). 4.Bibliografía. Leighton SB (1981) SEM images of block faces, cut by a miniature microtome within the SEM¿A technical note. Scan Electron Microsc 2: 73¿76. Denk, W., & Horstmann. H. (2004). Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure. PLoS Biology, 2(11), e329, 1901-1909.