Ingeniería de biocatalizadores inmovilizados de lipasasCaptura de agregados bimoleculares por técnicas de inmovilización

Resumen

El objetivo principal de esta Tesis Doctoral es estudiar la relación entre las diferentes estrategias de inmovilización de lipasas y las propiedades de los diferentes derivados obtenidos: actividad, estabilidad, selectividad. Inicialmente observamos que a concentraciones moderadamente altas de lipasas (p.e. 2 mg/mL) las enzimas solubles se encuentran mayoritariamente como agregados bimoleculares de dos estructuras abiertas de la enzima. A partir de este resultado desarrollamos estrategias para inmovilizar la forma abierta y la forma cerrada de la lipasa de Thermomyces lanuginosus (TLL). La forma abierta se inmovilizó por adsorción interfacial sobre soportes hidrofóbicos, por adsorción iónica del agregado bimolecular y por inmovilización covalente del agregado bimolecular. La forma cerrada se inmovilizó covalentemente en presencia del surfactante CTAB (bromuro de hexadeciltrimetilamonio). Todos los derivados de las formas abiertas eran bastante más estables que el derivado de la forma cerrada. El derivado más interesante (adsorción hidrofóbica más recubrimiento con polialilamina) era 10 veces más activo que la enzima soluble diluida y 1800 veces más estable en experimentos de inactivación térmica. Diseñamos una nueva estrategia para fijar e inmovilizar selectivamente los agregados bimoleculares de TLL y de otras lipasas (Candida antarctica fracción B, Rhizomucor miehie, Lecitase). En todos los casos, los derivados de los agregados eran bastante más estables que el derivado de la forma cerrada. El derivado más estable era el de la Lecitase que 100 veces más estable que el derivado de la Lecitasa cerrada.