Mirna dynamics in T cell activation

Zusammenfassung

La expresión de microARNs en células T cambia ampliamente en respuesta a la activación. A las pocas horas, ocurre una bajada global en los niveles de microARNs, sobre la que destacan microARNs individuales que aumentan o disminuyen su expresión. En este trabajo, hemos seguido por secuenciación la cinética temprana de expresión de microARNs y sus modificaciones post-transcripcionales en células primarias humanas T CD4+ activadas por estimulación de receptor de células T o con IFN I. Se han identificado por su expresión diferencial un grupo de microARNs que no se habían vinculado antes con activación de células T. Los microARNs que disminuyen sus niveles presentan más uridilación en su extremo 3’, confirmando observaciones previas del laboratorio realizadas en células T de ratón. Los microARNs que aumentan su expresión presentan un enriquecimiento en adenilación en su extremo 3’. En medio de un contexto adverso en el que parece probable que opere un mecanismo activo de degradación de microARNs, es posible que la adición de adenina en 3’ suponga una protección que podría utilizarse para mejorar la estabilidad de microARNs en terapia. La estimulación del receptor de células T aumenta la expresión de las exoribonucleasas Dis3L2 y Eri1 (descritas por su capacidad de degradar preferentemente sustratos uridilados) y de las enzimas transferasas de uridina TUT4 y TUT7, que podrían estar uridilando sus sustratos. Buscando otras enzimas que pudieran jugar un papel en la degradación de microARNs en células T, se identificó ISG20L2 como una exoribonucleasa (3’ a 5’) capaz de interaccionar preferencialmente con microARNs uridilados. ISG20L2 degrada microARNs con una eficiencia que se ve afectada por los nucleótidos que encuentra en el extremo 3’. También identificamos que los aminoácidos D267, D183 and E185 están implicados en la actividad catalítica de ISG20L2. Estudiando los posibles sustratos de ISG20L2 en células T, por el momento, los microARNs no parecen ser la población más afectada por el silenciamiento de esta enzima, al menos en células J77 no activadas. Sin embargo, el ARN mensajero de moléculas inmunoreguladoras como AHR, NKG2D, CTLA4, CD137, TIM3, PD-L1 y CD69, se acumuló en ausencia de ISG20L2. Pese a que se ha descrito que ISG20L2 está implicada en biogénesis de ribosomas, la proliferación y supervivencia de clones J77 deficientes en esta enzima no se vieron comprometidas. Sin embargo, sí se observaron cambios en la regulación de moléculas importantes para la activación T como CD69, CD3ε, CD25, CTLA-4, PD-1 e IL2.