Caracterización virológica, monitorización del VIH y análisis de marcadores inmunes en sangre seca de población pediátrica y adulta de Kinshasa, República Democrática del Congo

Resumen

La pandemia del VIH afecta ya a 38 millones de personas en el mundo, y más del 90% de las nuevas infecciones por VIH ocurren en África subsahariana. En Kinshasa, la capital de República Democrática del Congo (RDC) y epicentro de la pandemia del VIH, se observó una alta diversidad genética del VIH, con co-circulación de múltiples y complejas variantes del VIH. En esta Tesis se estudió el virus del VIH en población infectadas de Kinshasa, principalmente población pediátrica, con escaso conocimiento sobre su caracterización epidemiológica, resistencia antirretroviral, estado de inmunidad o cobertura vacunal, entre otros. En nuestro estudio utilizamos principalmente muestras de sangre seca (DBS), como alternativa al plasma, por ser más fácil de recolectar y enviar, y evaluamos su utilidad en diferentes metodologías. Los principales objetivos de esta Tesis fueron: 1) evaluar las nuevas técnicas moleculares point of care (POC) para el diagnóstico y cuantificación del VIH con una alta diversidad de recombinantes del VIH-1; 2) caracterizar las variantes circulantes del VIH y sus tendencias temporales en Kinshasa y RDC; 3) describir la prevalencia de mutaciones de resistencia (MDR) a fármacos antirretrovirales (ARV) y su impacto terapéutico en pacientes pediátricos infectados por VIH; 4) analizar el impacto de la exposición y la infección por VIH en los perfiles inmunitarios de pacientes pediátricos; 5) analizar y cuantificar la presencia de inmunoglobunlinas G (IgG) protectoras frente a patógenos responsables de enfermedades prevenibles por vacunación. Confirmamos la utilidad de las pruebas POC Xpert HIV-1 para la detección y cuantificación de recombinantes complejos del VIH utilizando DBS, identificando 8 diagnósticos falsos positivos de VIH realizados en RDC. Observamos una alta correlación (R2 = 0,89) durante la cuantificación de la carga viral (CV) mediante el uso de la técnica POC, Cepheid Xpert HIV-1 CV y la prueba no POC COBAS TaqMan HIV-1 Test v2. Ambas técnicas mostraron diferencias clínicamente relevantes (CV ≥0,5 log) entre ambos ensayos en el 15,4 % de los 78 pacientes. Presentamos los primeros datos que confirman la utilidad de las pruebas Xpert HIV-1 para la detección y cuantificación de formas recombinantes únicas (URF) del VIH. También proporcionamos información única y actualizada relacionada con las variantes del VIH-1 que circulan actualmente en Kinshasa, informando de las tendencias temporales de los subtipos, CRF y URF durante 43 años en RDC. Las principales variantes del VIH encontradas en nuestra cohorte fueron A (26,7%), G (9,7%), C (7,3%), CRF (12,7%) y URF (23,6%). Identificamos el primer CRF47_BF descrito en África y 4 grupos de transmisión. Se observó un aumento significativo del subtipo A y subtipo F1 y una reducción significativa del subtipo A1 y subtipo D durante el periodo de 2016-2018 en comparación con 1983-2008. En cuanto a los pacientes pediátricos infectados por el VIH en tratamiento antirretroviral (TAR), el 89,1% presentó fallo virológico y el 67,3% portaba virus con MDR principales en 1 (12,7%), 2 (47,3%) o 3 (5,5%) familias de ARV. La mayoría de las secuencias virales albergaba MDR a ITINAN (73,5%) o ITIAN (61,2%), el 8,3% tenían MDR principales a IP y el 15% MDR secundarias a INI. Nuestros resultados apoyan la necesidad de un análisis de resistencias rutinarias para conseguir un TAR óptimo y para controlar la propagación de variantes del VIH resistentes en el país. Respecto a los biomarcadores inmunes, los niños infectados por VIH presentaron niveles superiores de 6 biomarcadores (CD14, HVEM, B7.1, Siglec-10, HIF-1α y CD163) que el grupo de niños no expuestos. En el grupo de niños expuestos, encontramos 6 biomarcadores elevados (CD14, HVEM, B7.1, Siglec-10, HIF-1α e IRAK-M) frente a los niños no expuestos. Cinco biomarcadores (CD14, HVEM, B7.1, Siglec-10 y HIF-1α) presentaron mayor expresión tanto en los niños infectados por VIH como en los expuestos frente al grupo de no expuesto, con HVEM y CD14 sobreexpresados en los niños con VIH frente a los expuestos. Todas estas diferencias significativas en la expresión de biomarcadores específicos entre los grupos sugirieron un fuerte impacto de la infección y/o la exposición al VIH en la expresión de estos biomarcadores inmunes. Por último, la cohorte pediátrica en estudio mostró niveles bajos de inmunización frente a difteria, tétanos, tosferina, sarampión, paperas y rubéola, siendo más bajos en niños infectados por VIH que en niños no infectados. También establecimos los valores de corte que proporcionaron una sensibilidad y/o especificidad óptimas en DBS para cada infección. Nuestros datos respaldan la utilidad de los DBS para diversas pruebas de diagnóstico y monitorización del VIH, de cuantificación de marcadores inmunitarios y de seguimiento de la cobertura de vacunación en países de bajos y medios recursos. En estos países, se dan la mayor parte de nuevas infecciones por VIH y tienen unos recursos sanitarios limitados.