Trasplante intestinal y rechazoestudio experimental con células troncales mesenquimales derivadas de tejido adiposo para su prevención, y perspectivas clínicas futuras en la búsqueda de la tolerancia inmunológica

Résumé

ANTECEDENTES Y OBJETIVOS: Los resultados a largo plazo del trasplante intestinal (TI) en términos de supervivencia (tanto del paciente como del injerto), siguen siendo mucho peores que los de otros órganos sólidos, por las características inmunogénicas del intestino. Así, pese al perfeccionamiento de las técnicas quirúrgicas y mejor estado general con que llegan los pacientes al trasplante, la complicaciones inmunológicas siguen siendo la asignatura pendiente, entre ellas el rechazo, que si es grave lleva al retrasplante, o incluso al fallecimiento del paciente. Los mecanismos fisiopatológicos del rechazo no están claramente definidos, y por tanto, es difícil llegar al diagnóstico y acertar con el tratamiento adecuado. Las células troncales mesenquimales (CTM) han surgido recientemente como una terapia prometedora, tanto por su ausencia de toxicidad como por sus características regenerativas e inmunomoduladoras, aunque hay poca experiencia en el terreno del Trasplante de Órgano Sólido. Por ello, la hipótesis de esta tesis doctoral fue que podrían jugar un papel importante inmunomodulador en la prevención del rechazo. En caso de confirmarse, serían una terapia totalmente novedosa que permitiría disminuir la dosis de los inmunosupresores actuales, no exentos de efectos secundarios, y por la misma razón también podrían tener un papel en el tratamiento del rechazo establecido y en otras complicaciones relacionadas, como la enfermedad injerto contra huésped. DESARROLLO DEL TRABAJO Y METODOLOGÍA: Para ello se planteó un estudio experimental donde se desarrolló un modelo de rechazo agudo tras un trasplante intestinal alogénico heterotópico en rata, utilizando cepas altamente incompatibles (Brown-Norway como donante y Lewis como receptor). La primera fase consistió en conseguir la supervivencia del animal tras el TI. La segunda en establecer el modelo de rechazo, mediante ajustes de la dosis y días de Tacrolimus, y del día de sacrificio. En la tercera y principal, se establecieron cuatro grupos (1.-control, 2.- Tacrolimus 5 días, 3.-Control con CTM, 4.-Tacrolimus 5 días más CTM), todos ellos sacrificados 14 días tras el TI. Las CTM se extrajeron de tejido adiposo, ya fuera de la misma cepa que la receptora (CTM autólogas), o distinta (Third party), y se inyectaron diluidas en 1 ml de Ringer Lactato a través de la arteria mesentérica superior inmediatamente antes del desclampaje, a una dosis de 1`5-2 x 106 CTM/ml). Se estudiaron las diferencias entre los grupos, a efectos de supervivencia, desarrollo y grado de rechazo, manifestaciones clínicas, poblaciones del sistema inmune en el injerto, y expresión plasmática de citoquinas, con el fin de buscar un papel inmunomodulador de las mismas en la prevención del rechazo. APORTACIONES DE CARÁCTER GENÉRICO O EXPERIMENTAL Aportamos una extensa revisión bibliográfica de la utilización de las CTM en el campo del Trasplante de Órgano Sólido, y en particular, del TI, tanto a nivel preclínico (in vitro o en modelos de experimentación) como los primeros ensayos clínicos relacionados. También desarrollamos la fisiopatogenia del rechazo en el TI, así como de los métodos diagnósticos y terapéuticos utilizados hasta la fecha y en fase de investigación, así como los resultados internacionales y de nuestro centro, con el fin de conseguir una perspectiva global del tema, que facilitase la creación y el desarrollo de futuros estudios. La conclusión fue que se trata de un problema de enorme complejidad y que los mecanismos fisiopatológicos del rechazo aún no están claros. Con respecto a la parte experimental, no encontramos una mejoría en la prevención del rechazo en los grupos tratados con CTM. Sí vimos algunas diferencias en cuanto a macrófagos, CD4, CD8 y CD20 y células Foxp3 en el injerto, y también observamos diferencias en las citoquinas plasmáticas secretadas, tanto pro como antiinflamatorias y en algunas quimoquinas. Sin embargo, faltan más estudios para poder interpretarlas. La revisión bibliográfica nos dio la clave para justificar nuestros resultados, ya que es posible que las CTM administradas justo en el momento del trasplante no ejercieran su función inmunomoduladora al actuar en unas condiciones proinflamatorias que desviaron el destino tolerogénico de estas células, hacia uno más proinflamatorio, en respuesta a la agresión. Esta tesis abre la puerta a futuros estudios que probablemente den la clave para administrar las CTM a una dosis, en un momento, por una vía, y en unas condiciones idóneas, que consigan los resultados esperados, y no descarta la probabilidad de utilizarlas en clínica en futuro más o menos cercano. PUBLICACIONES A QUE HAYA DADO LUGAR: • “Difficulties, guidelines and review of developing an acute rejection model after rat intestinal transplantation”. Ane Miren Andres, Monica Santamaria, Francisco Hernandez-Oliveros, Laura Guerra, Sergio Lopez, Pablo Stringa, Maria Teresa Vallejo, Carlota Largo, Jose Luis Encinas, Maria Soledad Garcia de las Heras, Manuel Lopez Santamaria, Juan Antonio Tovar. Transplant Immunology, Transpl Immunol. 2016 May;36:32-41. doi: 10.1016/j.trim.2016.04.003. • “Small bowel transplantation in rats, a multicenter experience summarizing the pitfalls to be overcome”. Stringa P and Andres AM, Lausada N, Pastor C, Abate JC, Vecchio L, Rumbo M, Navarro- Zorraquino M, Hernández-Oliveros F, Gondolesi, G. Transpl Open, 2016; doi: 10.15761/JTO.1000114