Characterization of Vaccinia virus alternative antigen transport and processing pathways for their presentation to cytotoxic CD8+ T lymphocytes

Resumen

Los linfocitos T citotóxicos CD8+ (CTL) exploran la superficie de las células del organismo en busca de anomalías, lo que permite su correcta eliminación. Para que esto sea posible, las células del organismo procesan proteínas tanto endógenas como derivadas de patógenos, generando péptidos que se cargan y presentan en moléculas del complejo principal de histocompatibilidad de clase I (MHC-I). La presentación de antígenos por la vía clásica involucra al transportador asociado a presentación antigénica (TAP). Este transportador permite a los antígenos peptídicos acceder al retículo endoplasmático, donde se asocian los complejos MHC-I. Sin embargo, se han descrito diferentes epítopos que se presentan de forma independiente de este transportador. Nos propusimos caracterizar la o las proteasas implicadas en la presentación independiente de TAP. Utilizando linfocitos T CD8+ purificados de bazos de ratones C57BL/6 infectados con el virus vaccinia y células dendríticas derivadas de médula ósea (BMDC), estudiamos la importancia del proteasoma en la presentación de antígenos independientes de TAP. Midiendo la activación mediante la técnica de tinción intracelular de citoquinas (ICS) de los linfocitos T CD8+ purificados estimamos que tras el tratamiento con el inhibidor del proteasoma lactacistina (LC) a BMDC de ratones C57BL/6 y TAP1-/-, la inhibición de la presentación de antígeno es fuerte y similar en ambos casos. Por tanto, al igual que en las BMDC silvestres, el proteasoma juega un papel principal en la presentación de antígenos en BMDC deficientes en TAP. Con el objetivo de caracterizar proteasas alternativas involucradas en el procesamiento de antígenos virales estudiamos, para una batería de ocho epítopos, la activación de CTL monoespecíficos tras estimularlos con BMDC infectadas y tratadas con inhibidores de diferentes proteasas. Sólo observamos un efecto sobre la presentación antigénica tras el tratamiento con el inhibidor de pro-protein convertasas dec-RVKR-cmk, que inhibió en gran medida la presentación de uno de los ocho epítopos. Una vez conocida la existencia de mecanismos alternativos de presentación en MHC-I, quisimos saber si estos tenían relevancia fisiológica en una infección por el virus vaccinia. Para ello, inoculamos tanto ratones silvestres como TAP1-/- con BMDC cargadas con péptidos sintéticos. Tras catorce días, infectamos los ratones con virus vaccinia y medimos la carga viral a diferentes días post-infección y en diferentes órganos. En bazo, observamos un efecto protector de los tres péptidos tanto en los ratones silvestres como en los ratones TAP1-/-. Estos resultados sugieren que distintos tipos celulares podrían tener activas distintas vías alternativas de procesamiento antigénico, siendo más relevantes en unos órganos que en otros. También, confirman la existencia de las vías independientes de TAP descritas previamente en el laboratorio para los epítopos estudiados.