Detección e identificación de los virus del papiloma humano. Caracterización de dos nuevas variantes

Resumen

Los Papilomavirus Humanos (VPHs) son virus que causan enfermedades proliferativas en el epitelio de piel y mucosas. Su relación con el cáncer de cuello de útero se conoce desde la década de los 70 y actualmente está ampliamente aceptado que los papilomavirus humanos son el único agente etiológico causante del cáncer cervical. Constituyen un grupo de virus muy heterogéneo, dentro del cual destacan por cuestiones de tipo clínico algunos genotipos que presentan un alto potencial oncogénico y que son los causantes de la mayoría de los carcinomas invasores de cérvix. Se han desarrollado vacunas contra algunos de estos genotipos, y actualmente se están incluyendo en los programas nacionales de vacunación de un gran número de países. La tesis describe un trabajo de investigación que ha aportado tres aspectos novedosos que se presentan en los tres capítulos en los que está estructurada. En el primer capítulo se describe un nuevo sistema de detección e identificación de papilomavirus humanos de amplio espectro. El método está basado en la PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y en RFLPs (análisis de fragmentos de restricción). Permite la identificación de los genotipos víricos presentes en las muestras clínicas con lesiones precursoras de cáncer de cuello de útero. De esta forma permite valorar el potencial evolutivo de las lesiones pre-cancerosas, ya que cada genotipo vírico presenta un nivel de riesgo específico. Asimismo, el método incorpora un mecanismo molecular desarrollado especialmente para el presente trabajo que permite detectar las eventuales inhibiciones de las reacciones de amplificación. En el segundo capítulo se describe la utilización del método presentado, para el estudio de 9.734 muestras clínicas procedentes de varios hospitales y centros sanitarios españoles. Se esta forma se consiguió detectar e identificar el genotipo vírico en un gran número de muestras y obtener información estadísticamente significativa respecto a la distribución de los diferentes genotipos en la población. También se estudió la relación entre la gravedad de la lesión y la edad con el genotipo presente en la muestra. En el tercer capítulo se describe el trabajo de caracterización de dos nuevas variantes detectadas con el método presentado en el primer capítulo. Este sistema de identificación permite la detección de un gran número de genotipos conocidos de papilomavirus, así como de variantes no descritas previamente. Esto permitió la detección de dos nuevos genotipos, que fueron secuenciados completamente y clasificados taxonómicamente como dos nuevos subtipos de tipos actualmente conocidos. En la presente tesis se ha desarrollado un sistema de detección e identificación de papilomavirus que ha sido comercializado como un producto para diagnóstico in vitro. Por otro lado, este sistema también ha sido comercializado como un servicio de laboratorio, consistente en la realización de una prueba y la emisión de un informe clínico. En total se han podido analizar aproximadamente unas 26.000 muestras clínicas utilizando este sistema El aspecto más destacado de este trabajo de tesis es el desarrollo de un sistema de detección e identificación de papilomavirus y su demostrada aplicabilidad clínica, así como su utilidad como método para la realización de estudios estadísticos sobre la distribución de genotipos víricos.