Descubrimiento y evaluación biológica de un sistema pirido[2,3-d]pirimidínico como potencial pan-inhibidor para el tratamiento del cáncer de pulmón

Resum

El laboratorio de síntesis del IQS posee amplia experiencia en la síntesis de compuestos heterocíclicos con estructura pirido[2,3-d]pirimidínica similares a ITQs cuyo uso clínico está ampliamente extendido como ibrutinib. Así pues, se seleccionaron 60 de estos compuestos para ser estudiados frente 24 tirosina-quinasas, de los cuáles en los 16 con mejores resultados se iniciaron sus estudios biológicos in vitro. Tres de estos compuestos resultaron activos con IC50 inferiores a 5 µM. Sin embargo, la elevada toxicidad selectiva y la sencillez sintética de uno de ellos, propiciaron que el desarrollo posterior tan solo se llevó a cabo con PB1. PB1 es una molécula orgánica pequeña con una ruta sintética simple que ha presentado una elevada actividad contra la proteína DDR2 purificada en sus formas wt y mutada. El compuesto se ha probado posteriormente en un panel de líneas celulares tumorales de diferentes orígenes e histologías en las que mostró una buena actividad antiproliferativa con IC50s inferiores a 1 μM frente: i. Líneas celulares SCC con mutaciones de DDR2 como la H2286 y la HCC366. ii. Líneas celulares tumorales de pulmón SCC con DDR2 wt como la H520 y la H1703. iii. Algunas líneas celulares de adenocarcinoma pulmonar con mutaciones de KRAS como la A549. iv. La línea celular SW48 de adenocarcinoma colorrectal con la mutación puntual G719S del exón 18 de EGFR. Las dos líneas celulares ensayadas portadoras de la mutación activadora I638F de DDR2 son extremadamente sensibles a PB1, con una IC50 en el rango nanomolar. El compuesto también muestra una buena actividad contra células con la mutación L239R de DDR2. Se han generado dos líneas celulares resistentes a dasatinib, un inhibidor de DDR2, derivadas de las líneas celulares H2286 y HCC366. Las células han mostrado IC50s para dasatinib superiores a 25 μM, pero permanecen sensibles a PB1, con IC50s de 0,6 μM y 5,92 μM, respectivamente. Finalmente, cuando PB1 se ha ensayado en líneas celulares no tumorales no se ha observado toxicidad a las concentraciones ensayadas (hasta 50 μM) indicando un buen índice terapéutico del compuesto. Los estudios de western blot se han utilizado para estudiar los efectos de la activación en DDR2, ERK y AKT en presencia de PB1 en distintas líneas celulares y elucidar su mecanismo de acción. Los estudios anteriores se han complementado con estudios preliminares in vivo para decidir sobre la continuación del desarrollo de PB1.