Estudio de la regulación del promotor del gen p22phox en las células de músculo liso vascular de la rata espontáneamente hipertensaefecto del fenotipo hipertensivo y de la presencia de polimorfismos

Resumen

En la hipertensión esencial y en varios modelos animales de hipertensión, incluído el de la rata espontáneamente hipertensa (SHR), se ha descrito una alteración en la función endotelial de la pared vascular. Aunque los mecanismos celulares implicados en el desarrollo de esta disfunción son multifactoriales, trabajos recientes sugieren que esta alteración en la rata SHR se encuentra asociada con una disminución aparente en la biodisponibilidad de óxido nítrico asociada a un exceso de anión superóxido. Varias observaciones sugieren que el sistema enzimático de la NAD(P)H oxidasa, del cual la p22phox es una subunidad esencial, es responsable de la mayor cantidad de anión superóxido generado en la pared vascular. En un estudio previo hemos demostrado que la subunidad p22phox se encuentra sobreexpresada en la aorta de la rata SHR adulta, lo que se acompaña de un incremento en la actividad del complejo enzimático de la NAD(P)H oxidasa. En el presente trabajo hemos investigado si esta sobreexpresión observada en la aorta de la rata SHR puede deberse a la existencia de variantes polimórficas en la secuencia promotora del gen p22phox de la rata SHR con respecto al de su control normotenso WKY. Para la realización de este trabajo en primer lugar caracterizamos la estructura del gen p22phox de rata. El gen p22phox se extiende a lo largo de aproximadamente 10 kpb y contiene 6 exones y 5 intrones,y el punto de inicio de la transcripción se localiza a 100 pb en posición 5' con respecto al sitio de inicio de la traducción. La región promotora inmediata no posee la característica caja TATA, pero presenta cajas CCAC y cajas CAAT además de sitios de reconocimiento para diversos factores de transcripción como SP1, NF-kB yAP-1. La transfección de construcciones delecionadas del promotor en un vector con el gen de referencia de la luciferasa, ha permitido determinar la funcionalidad del mismo en células de músculo liso vascular (CM