Efecto del polimorfismo 930 a/g de la region promotora de cyba sobre el estres oxidativo mediado por la enzima nadph oxidasa en la hipertension arterial esencial

Résumé

El aumento en los niveles de anión superóxido debidos a la activación del sistema NADPH oxidasa es clave en los procesos fisiopatológicos de enfermedades cardiovasculares como la hipertensión y la aterosclerosis. El aumento de la actividad NADPH oxidasa está asociado a una mayor expresión de sus componentes, en especial de la subunidad p22phox. En este sentido, trabajos anteriores de nuestro laboratorio (l,2) han descrito que el incremento en la actividad nadph oxidasa vascular en la rata espontáneamente hipertensa se asocia con la existencia de polimorfismos en la región promotora del gen p22phox que generan una mayor actividad promotora in vitro. De ahí que la hipótesis de esta tesis fuera la existencia de polimorfismos en la región promotora de CYBA, el gen humano que codifica la subunidad p22phox, que puedan modular la actividad promotora y los niveles de expresión de p22phox, así como la actividad nadph oxidasa, en el contexto de la hipertensión arterial esencial. Los objetivos propuestos para validar dicha hipótesis y los resultados obtenidos fueron: I. Estudios moleculares: se caracterizó la secuencia del estremo 5' de CYBA, que presenta múltiples sitios de unión putativos a factores de transcripción. El principal punto de inicio de la tanscripción en riñon coincide con el residuo de citosina localizado a 231 pb del codón atg. El extremo 5' presenta actividad promotora en células de músculo liso vascular. II. Estudios genéticos: la comparación de la secuencia promotora de CYBA entre sujetos hipertensos resultó en la identificación de cuatro polimorfismos de cambio de base en las posiciones -930A/g, -852C/g, -675A/t y -536C/t contando desde el codón atg de inicio de la traducción. Diseñamos además un protocolo fiable y sencillo de genotipaje por restricción para las cuatro variantes. El análisis de la distribución de los polimorfismos entre una población de 153 sujetos normotensos y 212 hipertensos reveló que los polimorfismos -930A/g y -675A/t se asocian con la hipertensión arterial esencial. Por otro lado, del análisis del desequilibrio de ligamiento se dedujo que el polimorfismo -930A/g segrega de manera independiente del -675a/t. III. Estudios funcionales: la funcionalidad in vitro del polimorfimo -930A/g parece estar mediada por el factor de transcripción c/ebp delta. Los estudios in vivo revelaron que los sujetos hipertensos y con genotipo gg para el polimorfimo -930A/g presentan mayor estrés oxidativo, pues la expresión de p22phox y la actividad nadph oxidasa en sus células fagocíticas se encuentra aumentada. También presentan menores niveles séricos de nitratos/nitritos, marcadores de una menor síntesis de óxido nítrico. IV. Estudios de asociación: los sujetos hipertensos y de genotipo gg para el polimorfimo -930A/g presenta, independientemente de otros factores clínicos, mayores niveles de factor von Willebrand, un marcador de daño endotelial, de riesgo de aterosclerosis y de eventos cardiovasculares. En conclusión, el genotipo gg del polimorfimo -930A/g es un nuevo y precoz marcador de la severidad del estrés oxidativo mediado por la nadph oxidasa y del daño endotelial en el contexto de la hipertensión. Puede constituir así mismo un marcador del riesgo aterosclerótico y de eventos cardíacos y pudiera ser determinante en la adjudicación de terapia farmacológica en dichos sujetos. l. zalba g, Beaumont FJ, San José g, Fortuno A, Fortuno MA, Etayo JC, et al. vascular nadh/nadph oxidase is involved in enhanced superoxide production in spontaneously hypertensive rats. Hypertension 2000;35(5):1055-61. 2. zalba g, San José g, Beaumont FJ, Fortuno MA, Fortuno a, Diez J. Polymorphisms and promoter overactivity of the p22(phox) gene in vascular smooth muscle celis from spontaneously hypertensive rats. circ Res 2001;88(2):217-22.