Efecto de la administración de plásmidos que codifican citoquinas y moléculas coestimuladoras sobre la respuesta inmune inducida por vacunas dna en cerdo

Laburpena

En esta tesis hemos evaluado el efecto de la administración de plásmidos que codifican citoquinas (IFN-y, GM-CSF), quimioquinas (MIP-1beta) o moléculas coestimuladoras (CD86) sobre la respuesta inmune inducida por vacunas DNA en cerdo. Como antígenos virales clonamos las poliproteínas P1 y 3ABC-T del virus de la Fiebre Aftosa. Además construimos un minigen (AT) que codifica la secuencia de un epítopo B residuos (140-160 de VP1) unido a un epítopo T (residuos 20-34 de VP4). En el modelo del virus del Síndrome Respiratorio y Reproductor Porcino, clonamos las ORF4 y ORF7. La coinoculación con pGM-CSF produjo un aumento en los niveles de anticuerpos y una respuesta proliferativa más temprana y de mayor magnitud con respecto a los animales inoculados con pP1 y p3ABC-T. La coadministración de pINF-y, aunque también indujo un ligero aumento en la respuesta humoral, parecía ejercer un efecto negativo en la respuesta proliferativa. Por ello, y dado que el IFN-y puede actuar sobre distintos promotores, estudiamos el efecto de pIFN-y sobre la expresión de proteínas clonadas bajo CMV utilizando como gen de referencia el de la GFP. La cotransfección de células con pIFN-y causó una reducción en el número de células que expresaban GFP, que era dependiente de la cantidad de pIFN-y empleada. Al menos parte de esta inhibición parecía deberse a un mecanismo de acción intracelular de IFN-y sin que pareciera intervenir la inducción de mecanismos de muerte celular. La coinoculación en cerdos de pMIP-1beta y pCD86 con pORF4 y ORF7 indujo una respuesta humoral con predominio de IgG1 pero no protegía frente a la infección. Aunque no hay diferencias significativas entre los niveles de anticuerpos de los animales inoculados sólo con pORF4 y pORF7, y los de los grupos coinoculados con pMIB-1beta o pCD86, la respuesta humoral de estos últimos fue más homogénea, observándose además un mayor número de animales positivos. Co