Medida de la longitud del telomero y análisis de la actividad telomerasa en tejidos tumorales y muestras de sangre periferica de pacientes pediatricos afectos de tumores oseos a lo largo del tratamiento antitumoral

Zusammenfassung

INTRODUCCION La telomerasa es una ribonucleoproteína que está activada en 85-90% de los tumores y líneas celulares tumorales, que incorpora las repeticiones teloméricas que se pierden cada vez que la célula se replica y que son imprescindibles para que la célula tumoral pueda proliferar de manera ilimitada. Algunos tumores desarrollan mecanismos alternativos a la telomerasa para el mantenimiento de los telómeros durante la progresión tumoral. Los tumores óseos suponen, en España, 7% del total de las neoplasias pediátricas correspondiendo 4% al osteosarcoma (OS) y 3% al sarcoma de Ewing (SE). MATERIAL Y MÉTODOS Se ha analizado la longitud de los fragmentos teloméricos de restricción (FTR) de muestras de sangre periférica de pacientes afectos de tumores óseos a lo largo del tratamiento antitumoral, así como periférica de pacientes afectos de tumores óseos a lo largo del tratamiento antitumoral, así como en muestras de tejido tumoral primario (T1º) y metastásico (MTT) mediante Southern Blot. Además, se ha analizado la presencia de actividad telomerasa en dichos tejidos tumorales, mediante la técnica TRAP, así como la expresión de las tres subunidades la constituyen: hTERT, hTERC y Htep1, por RT-PCR, y el grado de metilación de la región promotora de la subunidad catalítica hTERT empleando MS-PCR. RESULTADOS Se ha encontrado actividad telomerasa en 100% de las MTT de SE y 75% de OS, mientras que sólo 12,5% de los T1º de SE y 11% de OS poseían actividad telomerasa. De las tres subunidades constitutivas de la telomerasa, la hTEP1 y la hTERC, se expresan en todas las muestras analizadas, pero la subunidad catalítica sólo lo hace en los tejidos que poseían actividad telomerasa. No se ha encontrado relación entre el grado de metilación del promotor de la subunidad hTERT y su expresión, salvo en el caso de la hipermetilación, que parece inhibir la expresión del gen. Se ha detectado relaci