Expresion de las proteinas estructurales del virus de la hepatitis c (vhc) mediante adenovirus recombinantesaplicacion a la induccion y caracterizacion de una respuesta inmune

Resumen

Se han construido dos adenovirus recombinantes no replicativos (radcmv-ce1 y radcmv-ce1e2) contenido los genes estructurales del core-e1 y core-e1-e2 respectivamente. Radcmv-ce1 y radcmv-ce1e2 son capaces de infectar celulas humanas y de raton, y de expresar dentro de ellas las correspondientes proteinas procesadas. Una unica inmunizacion de ratones balb/c con los recombinantes es capaz de inducir una respuesta inmune citotoxica contra las tres proteinas del vhc. La identificacion de los principales epitopos citotoxicos dentro de ellas se ha realizado empleando cientocatorce peptidos sinteticos solapados, que recorren la secuencia de las tres proteinas. Los mismos siete peptidos del core y de la e1, han sido reconocidos cuando los ratones se han inmunizado con radcmv-ce1 o radcmv-ce1e2. Ademas, radcmv-ce1e2 ha sido capaz de inducir una respuesta inmune citotoxica contra seis peptidos de la proteina e2. Una caracterizacion mas profunda de la respuesta inmune inducida contra el peptido 312-326 de e1, mostro que: i) el epitopo minimo comprende la secuencia aminoacidica ghrmawdm, ii) los ltc inducidos tienen el fenotipo cd8+, restriccion h-2d y larga duracion (al menos 100 dias), y iii) estos linfocitos son capaces de lisar fibroblastos que expresan la proteina e1 del vhc. Usando este protocolo de inmunizacion, no se ha detectado produccion de anticuerpos contra las proteinas recombinantes, sin embargo, despues de dos o mas inmunizaciones con estos recombinantes, tambien se ha detectado produccion de anticuerpos. Todos estos resultados nos permiten creer que se deberia considerar el uso de radcmv-ce1 y radcmv-ce1e2 para ensayos de proteccion, asi como para el tratamiento de pacientes cronicamente infectados por el vhc.