Analisis de mutaciones y de microsatelites en el gen de la fibrosis quistica

Abstract

Se ha analizado el dna de pacientes afectos de fibrosis quistiva (fq) para buscar las mutaciones causantes de la enfermedad. Se han analizado mediante dgge (denaturing gradient gel electrophoresis) los exones 14a, 15, 16, 20 y 23 del gen y no se han detectado mutaciones en dichas regiones; se han detectado los polimorfismos t854t (exon 14a) y p1290p (exon 20). La presencia de la df508 se analizo mediante electroforesis en geles de poliacrilamida no desnaturalizantes, detectandose la delecion en 74,2% de los cromosomas. Mediante multiplex arms (amplification refractory y mutation system) se han analizado las mutaciones g551d, g542x, 621+1gt y df508, encontrandose la g551d en 3,03% de los cromosomas fq estudiados y la g542x en 1,5% de ellos. Se ha determinado el haplotipo para los marcadores microsatelite ivs8ca,ivs17bta e ivs17bca en 81 familias con un miembro efecto de fq y 128 pacientes de diferentes origenes geograficos. Este analisis ha permitido determinar los haplotipos presentes en 109 cromosomas normales y 150 df508 encontrandose 41 y 15 haplotipos diferentes respectivamente. Tres de los haplotipos presentes en cromosomas normales: 16-30-13, 16-13 13 y 16 32 13 suponen 42,2% del total de haplotipos, mientras que en los df508 el 23-31-13 y 17-32-13 suponen 70,1% del total. Se ha prestado especial interes al estudio de las mutaciones g551d y r117h. Se han reunido 62 cromosomas g551d y la mutacion se ha encontrado asociada con un unico haplotipo para los microsatelites: 16-7-17, por lo que se considera igual por descendencia en los cromosomas fq, estableciendo su edad en 155 generaciones. Se han reunido 42 cromosomas r117h y la mutacion se ha encontrado asociada a un unico haplotipo para microsatelites: 16-30-13 y a dos haplotipos diferentes para los marcadores extragenicos km-19/pst i, xv-2c/taq i y mp6d-9/msp i, por lo que consideramos que dicha mutacion posee naturaleza recurrentes, estableciendo su edad en un minimo de