Estudio de la proliferacion de queratinocitos cultivados en medio libre de suero en presencia de ciclosporina a, ciclosporina h y calcio

Laburpena

En nuestro trabajo hemos desarrollado, y puesto a punto, la tecnica de cultivos de queratinocitos en medio libre de suero. La utilizacion de componentes de matriz extracelular (colageno iv) mejoro el rendimiento del cultivo primario y la incorporacion de timidina tritiada en los queratinocitos. Tanto el calcio como la ciclosporina a y la ciclosporina h, impidieron que las celulas en cultivo alcanzaran la confluencia. El calcio, a diferencia de ambas ciclosporinas, modifico la estructura de las colonias e indujo la aparicion de uniones intercelulares y granulos en el citoplasma de los queratinocitos cultivados. En incubaciones realizadas durante periodos cortos, no encontramos diferencias estadisticamente significativas al comparar la capacidad de 5.000ng/ml de ciclosporina a y ciclosporina h, para inhibir la incorporacion de timidina tritiada en los queratinocitos. Aunque a dosis intermedias (2.500 1.250 625 ng/ml), la ciclosporina a resulto mas efectiva que la ciclosporina h, a dosis bajas (625-312-256 ng/ml) las diferencias entre ambos farmacos se pierden. Esta inhibicion en la incorporacion de timidina tritiada en los queratinocitos observada con 5.000 ng/ml de ciclosporina a y ciclosporina h, se acompaño de un ligero descenso en la transcripcion del oncogen p53. Durante este tiempo no se modifico la transcripcion de oncogen erbb2 en presencia de la ciclosporina a, y disminuyo ligeramente cuando las celulas fueron tratadas con ciclosporina h. A las 96 horas, 5 ug/ml de ciclosporina a presentaron una mayor capacidad para inhibir la proliferacion celular que la misma concentracion de ciclosporina h. No encontramos diferencias estadisticamente significativas entre la capacidad antiproliferativa de 5 ug/ml de ciclosporina h y 1 ug/ml de ciclosporina a. Queratinocitos tratados con 5 ug/ml de ciclosporina a y ciclosporina h presentaron, al cabo de 48 horas, una caida en la expresion del p53. Este hecho puede interpretars