Transporte de la aminopeptidasa I a la vacuola de 'Saccharomyces cerevisae' identificación y caracterización de nuevos componenetes del proceso

Resumen

La aminopeptidasa I (API) de Saccharomyces cerevisiae es una enzima vacuolar que llega a este orgánulo por una vía de transporte vesicular diferente de la ruta secretora clásica. API se sintetiza en el citoplasma y es transportada a la vacuola en el interior de vesículas llamadas vesículas cvt o autofagosomas, según las condiciones metabólicas en que se encuentre la célula. El extremo amino terminal de la proteína API es determinante para su localización en estas vesículas. Para encontrar proteínas implicadas en este sistema de transporte, decidimos buscar aquéllas que interaccionaran in vitro con el extremo amino terminal de API, o in vivo, utilizando el sistema de doble híbrido. En el estudio in vitro se detectó la interacción de las chaperonas citosólicas de la familia de Hsp70, Ssa1p y Ssa2p, con la región amino terminal. Mediante el uso de un mutante portador de un alelo termosensible del gen SSA1 y carente del resto de3 los genes SSA, se pudo demostrar que la proteína Ssa1p es requerida in vivo para el transporte de API a la vacuola en un paso previo a la formación de las vesículas transportadoras. Utilizando el sistema de doble híbrido, confirmamos y caracterizamos la interacción entre API y una proteína, codificada por el gen YOL082w, entonces de función desconocida. El estudio del fenotipo de un mutante en dicho gen permitió demostrar la implicación de esta proteína, que se denominó Cvt19p, en la ruta de API a la vacuola. Los datos obtenidos nos permiten proponer que la proteína Cvt19p es necesaria para la carga selectiva de API en las vesículas cvt y en los autofagosomas.