Implicación del extremo Carboxi-terminal de la proteína Cot/tpl-2 en su actividad quinasa

Resum

Cot/tpl-2 quinasa es una MAP quinasa quinasa quinasa implicada en activación celular y proliferación. La deleción del extremo carboxi-terminal de Cot/tpl-2 desenmascara el potencial oncogénico de la proteína, sin embargo, por el momento se desconoce el mecanismo por cual se produce dicha transformación. En esta Tesis Doctoral, demostramos que la deleción del extremo carboxi-terminal de Cot wt incrementa la actividad Cot quinasa total mediante dos mecanismos diferentes. Cot truncada tiene una actividad quinasa específica 3,9 veces mayor que Cot wt. Además, la proteína Cot truncada, con una vida media de 95 min., tiene una expresión en estado estacionario 2,6 veces mayor que Cot wt, que muestra una vida media de 35 min. La combinación de estos dos sucesos, desencadena una actividad Cot quinasa específica total 10 veces mayor en las células transfectadas con Cot quinasa truncada comparadas con las transfectadas con Cot wt. En este trabajo además demostramos que tanto Cot wt como Cot truncada, son degradadas vías proteasoma en células intactas de un modo independiente de la ubiquitina. El proteasoma 20S degradada además, de forma más eficiente, a Cot wt que a Cot truncada traducidas y transcritas "in vitro", y lo que es más, el proteasoma también se encarga de la degradación de las formas inactivas de ambas quinasas. Por otro lado, la inserción del extremo carboxi-terminal de Cot wt en una proteína amarilla fluorescente (EYFP) confiere inestabilidad a la proteína y provoca la degradación de la proteína de fusión pEYFP-c-Cot 390-466 por el proteasoma. La proteína GST-c-Cot 390-466 es un sustrato para el proteasoma 20S "in vitro". Todos estos datos pueden explicar la capacidad transformante de Cot truncada.