Estudio fisiológico de las isoformas de hSos1 en proliferación celular

Resumen

La proteína hSos1 es un activador de Ras que actúa facilitando la transición de Ras-GDP a Ras-GTP. Se han identificado dos isoformas de hSoS1 diferenciándose solamente por la presencia de un inserto de 15 aminoácidos localizado en la región carboxi-terminal de hSos1-Isf II, próximo a los sitios canónicos de unión a Grb2, y ausente en hSos1-Isf I. Asi mismo, hSos1-Isf II presenta mayor afinidad por la proteína adaptadora Grb2 y mayor actividad biológica respecto a hSos1-Isf I. En esta tesis doctoral planteamos identificar la causa de la diferente afinidad de la sisoformas de hSos 1 con Grb2 y localizar la zona dentro de la región carboxi-terminal responsable de la regulación nefativa de la actividad de hSos1 dilucidando el mecanismo de dicha regulación. Hemos identificado dos nuevos sitios (SH3-MBS) de unión a Grb2 en la región carboxi-terminal de hSos1, estando uno de ellos dentro del inserto de 15 aminoácidos específico para la isoforma II y responsable de la mayor afinidad de hSos1-Isf II a Grb2 respecto a hSos1-Isf I. También demostramos que el nuevo sitio de unión a Grb2 (SH3-MBS) presente dentro del inserto es responsable de la diferencia funcional que existe entre las dos isoformas. Detectamos que la proteína hSos1 es capaz in vivo de forma complejos estables con Grb2 mediante los nuevos sitios SH3-MBS y que estos complejos se comportan en la activación de Ras y de la ruta de MAPK fisiológicamente igual que las proteínas hSos1 completas. Hemos visto que los mutantes truncados de hSos1 en la región carboxi-terminal presentan una mayor actividad biológica respecto a las isoformas completas tanto en activación de Ras y la ruta de Raf-MEK-MAPK, como en cooperar con Ras en la inducción del fenotipo transformante. Demostramos que la zona responsable de la regulación negativa dentro de la región carboxi-terminal de hSos1 es la que incluye los primeros dos sitios de unión a Grb2, y que la región más carboxi-te