Implicación de la región transmembrana de la cadenadel receptor de la célula T en el ensamblaje del complejo y en la transmisión de señales

Resumen

En esta Tesis Doctoral se resumen los datos originales obtenidos sobre el papel que juega la región transmembrana de la cadena beta del receptor de la célula T (TCR/CD3) en el ensamblaje con el resto del complejo y e la transmisión de señales. Mediante mutagénesis dirigida y transfección estable en células deficientes de cadena beta, se han obtenido líneas celulares reconstituídas en la expresión de su complejo TCR/CD3, tanto en su versión wild-type como mutante. Utilizando este modelo, se demuestra que los transfectantes que incluyen la mutación Y/L en la tirosina C-terminal del motivo presentan un defecto en el ensamblaje con la cadena zeta, lo que no influye funcionalmente en la secreción de IL-2, expresión de marcadores de activación, movilización del calcio, fosforilación total de proteínas e internalización del receptor. Se observa, sin embargo, que la señalización en las células mutantes no se traduce en la pérdida de viabilidad que es esperable tras la adecuada estimulación del complejo. Medidas de degradación del DNA junto con estudios a nivel de RNA mensajero demuestran que la escasa inducibilidad de Fase-L es el mecanismo básico que subyace en la resistencia de las células mutantes a la apoptosis. Ademas se muestra que las dos formas fosforiladas de zeta son inmunoprecipitadas y que la cantidad de ZAP70 asociada a zeta en esas células es insignificante. Ello a pesar de que ZAP70 es fosforilada normalmente y muestra una actividad kinasa semejante a la observada en inmunoprecipitados de células wild-type. En este contexto se demuestra que mientras que ZAP70 se recluta a un espacio proximal a la membrana en células wild-type estimuladas, se mantiene uniformemente distribuida en el citosol de las células mutantes activadas. Se puede concluir que el sistema experimental utilizado ha permitido corroborar que la activación de la célula T no es un fenómeno binario regulado bajo un