Aislamiento y estudio comparativo de dos 5'-fosfodiesterasas/nucleótido pirofosfatasas de la membrana plasmática de hígado de rata y de células del hepatocarcinoma de rata AS-30D

Abstract

La membrana plasmática de hígado de rata contiene cinco glicopolipeptidos que se adenililan y se fosforilan en residuos de treonina al utilizar ATP como sustrato. Por otra parte, la membrana plasmática de células del hepatocarcinoma de rata AS-30D contiene tres glicopolipeptidos de pesos moleculares similares que también se adenililan en treonina utilizando ATP como sustrato; una de ellos, además, se fosforila. Hemos aislado, mediante cromatografía de afinidad en ATP-agarosa, un dimero gp120-gp110 de hígado de rata y una glicoproteína de 115 kDa (gp115) de células tumorales AS-30D. Ambas proteínas se autoadenililan y se autofosforilan. La adenililación corresponde a la formación de la intermediarios catalíticos durante la hidrolisis enzimática del ATP. Las dos proteínas aisladas presentan actividades 5-fosfodiestenasa y nucleotidos pirofosfatasa (5-PDE y NPPasa) alcalinas y dependientes de cationes divalentes, pues son inhibidas por EDTA. Ambas actividades son estimuladas por iones Zn cuando se ensayan en un tampon glicina-NaOH; esta activación no se observa en un tampon Tris-HC1. La expresión y/o las actividades -PDE/NPPasa de la gp115 de células turmorales AS-30D son considerablemente menores que las del dimero gp120-gp110 de hígado de rata. Además, la proteína de hígado de rata normal y la proteína de células tumorales tienen distinta afinidad por sus sustratos. Hemos identificado el dimero gp120-gp110 como la proteína PC-1, una ecto-5-fosfodiesterasa que forma un intermediario adenililado durante su ciclo catalítico. Hasta la fecha, se ha descrito que la proteína PC-1 está formada por dos subunidades idénticas; sin embargo, solo la gp120 del dímero de hígado de rata es reconocida por un anticuerpo monoclonal contral el C-terminal de la PC-1 humana, lo que indica que las dos subunidades difieren en esta región. Por otro lado, la gp115 de células tumorales AS-30D no forma dímeros y no es