Clonaje y caracterización de una eIF2"alfa" quinasa de "Drosophila melanogaster"

Résumé

La fosforilacion de la subunidad alfa del factor de iniciacion eucariotico 2 (eif2alfa ) es uno de los mecanismos de regulacion negativa de la sintesis de proteinas mejor caracterizado, tanto en celulas de mamifero como en la levadura saccharomyces cerevisiae. Sin embargo este mecanismo de control de la sintesis de proteinas no ha sido descrito en drosophila. En esta tesis se ha llevado a cabo el clonaje y la caracterizacion de dgcn2, una eif2alfa quinasa de drosophila relacionada con la proteina quinasa gcn2 de levaduras. El cdna clonado codifica una proteina con una masa molecular teorica de 178,7 kda y la transcripcion- traduccion in vitro de este cdna origina un polipeptido de aproximadamente 175 kda. Dgcn2 esta codificada por un unico gen que da lugar a un unico transcrito de aproximadamente 6,5 kb. La expresion de este gen durante el desarrollo de drosophila se encuentra regulada. Durante la embriogenesis, el mrna de dgcn2 se expresa de manera dinamica en distintos tejidos. En los ultimos estadios embrionarios esta expresion se restringe a 2 pares de celulas del sistema nervioso central. Anticuerpos purificados por afinidad, obtenidos frente a peptidos sinteticos de la secuencia del dgcn2, especificamente inmunoprecipitan y reconocen una fosfoproteina de 175 kda a partir de extractos de embriones de drosophila.