La insulina embrionaria expresión y efectos en apoptosis y sobre precursores celulares durante el desarrollo temprano

Resumen

La tesis se centra en el estudio del papel de la insulina/proinsulina, actuando por la via de su propio receptor, en procesos como la proliferacion y supervivencia celular durante la neurulacion del embrion de pollo. Se demuestra que el gen de la preproinsulina se expresa, tanto a nivel de mrna como de proteina, en el embrion en neurulacion (e1,5). Para caracterizar el papel de la insulina en esa etapa embrionaria se ha utilizado un sistema de cultivo de deprivacion de factores de crecimiento. En este sistema la insulina exogena promueve el crecimiento general. Sin embargo, bajo ese efecto subyace el rescate de la muerte celular por apoptosis promovido por la insulina. En embriones cultivados con medio basal el porcentaje de celulas apoptoticas fue de un 15% sobre el total. Sin embargo, la adicion de insulina, como unico factor de crecimiento añadido al cultivo, supuso el rescate del 50% de las celulas. Asimismo, oligonucleotidos antisentido del mrna de la proinsulina y de su receptor inducen en los embriones en cultivo hasta un 50% de incremento en la proporcion de celulas apoptoticas. Estos datos tambien han sido confirmados en experimentos in vivo (aplicando los oligonucleotidos dentro del huevo), con lo que confirmamos la relevancia fisiologica de la insulina como factor de supervivencia durante la neurulacion. Hemos demostrado, ademas que una de las posibles vias de apoptosis implicada en la señal de supervivencia de la insulina es la de las proteasas de la familia de la "interleukin-1b-converting enzyme". Finalmente, para caracterizar si este efecto de supervivencia afecta a todas las celulas o solo a algunas de ellas, se ha estudiado la subpoblacion de celulas pm1+. Definida en retina como una subpoblacion de precursores neurales en proliferacion. Se ha determinado que la proinsulina endogena sintetizada por el embrion de e1,5 estimula preferencialmente la supervivencia/proliferacion de las celulas pm1+, actuando