Papel funcional de profilina en el citoesqueleto de actina. Aplicabilidad de los péptidos de transducción en estudios fisiológicos

Resumen

Las células trabeculares forman una estructura esponjosa, entre la córnea y el iris, que filtra y regula activamente la salida el humor acuoso del ojo. Diferentes alteraciones del citoesqueleto de actina, como la despolimerización de actina o la inhibición de la miosina, aumentan la evolución del humor acuoso, lo cual pone de manifiesto la importancia de la actina en la fisiología de la red trabecular. Por lo tanto, se consideró estudiar la función de la actina en este tejido mediante la PTD4-Pfnil como herramienta molecular para interferir con la dinámica del citoesqueleto de actina. La secuéncia PTD4 (Ho et al., 2001) es un péptido de transducción, permeable a membrana que, fusionado con Pfn, le permite acceder al interior celular. Profilina (Pfn) es una proteína que une monómeros de actina, le intercambia el ADP con ATP y presenta la actina-ATP al extremo + de un filamento de actina durante la polimerización. Pfn se encuentra en dominios intracelulares donde la actina es muy dinámica, como filopodios y lamelipodios. Primero, se crearon vectores de expansión para la producción de proteínas de fusión con PTD4, se clonaron en ellos los genes de profilina I (Pfnl: ubicua) y profilina II (PfnII; neuronal), así como de un marcador como *-galactosidasa, y se purificaron las proteínas de fusión resultantes. Después se comprobó la transducción de estas proteínas en células trabeculares y su dependencia del tiempo y de la concentración, así como su independencia de la temperatura. En células trabeculares en cultivo, se observó que PTD4-Pfnl inducía la formación de lamelipodios fue similar a la producida pro suero o factores de crecimiento, tanto por la presencia de marcadores de lamelipodios (Arp2/3 y Rac) como por la ausencia de lamelipodios tras la inhibición de diferentes componentes de la vía de señalización (Rac y PI4K) o de la contractibilidad (miosina y MLCK). Este efecto de PTD4-Pfnil dependía tanto de la unión a