Estudio cuantitativo y cualitativo del aplastamiento intraorbitario del nervio ópticocurso temporal de la degeneración neuronal, efecto neuroprotector de diferentes factores tróficos y expresión de neurofilamentos

Resum

Objetivos. 1) Diseñar una estrategia experimental para inducir un aplastamiento del nervio óptico (ApNO) que produzca de forma fiable y reproducible la interrupción de la totalidad de axones de las células ganglionares de la retina (CGR); 2) Investigar en ratas adultas los efectos del ApNO y de la administración de diferentes factores neurotróficos [factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), neurotrofina 4 (NT-4), factor neurotrófico ciliar (CNTF),] en el curso y cuantía de la muerte de las células ganglionares de la retina (CGR); y 3) Investigar en ratas adultas el patrón temporal de la degeneración en las capas de fibras y de CGR inducida por el aplastamiento (ApNO) o la sección (SNO) intraorbitaria del nervio óptico. Métodos. Para la validación de la técnica lesional, una vez realizado el ApNO se aplicaron trazadores neuronales en los colículos superiores (Fluorogold, FG) o mediante inyección intravítrea (Toxina Colérica subunidad B) que permitieran valorar la integridad de la vía retinofuga en sentido anterógrado y retrógrado. Dentro del estudio cuantitativo, en ratas adultas anestesiadas las células ganglionares de la retina se marcaron retrógradamente con el trazador neuronal fluorogold aplicado sobre la superficie de los colículos superiores. Siete días más tarde, se expuso el nervio óptico izquierdo en su trayecto intraorbitario y se lesionó aproximadamente a unos 3 mm del disco óptico. El aplastamiento intraorbitario se realizó con unas pinzas anguladas de relojero. La supervivencia de las CGR se determinó a los 5, 7, 9 ó 12 días de la lesión contando las CGR marcadas con FG en 32 regiones estándar de las retinas lesionadas (izquierdas) y sus controles (derechas). En otros grupos adicionales, inmediatamente tras el aplastamiento intraorbitario se realizó una inyección intravítrea de 5 µl que contenían 5 µg de BDNF, 5 µg de NT-4, o 5 µg de CNTF, y los animales se procesaron a los 7 ó 12 días de la lesi