Sintesis biocatalitica de kyotorfina en medios organicosanalisis de la actividad y estabilidad de la alfa-quimotripsina

Zusammenfassung

El objeto de la presente tesis doctoral consiste en el análisis de la actividad y estabilidad de la a-quimotripsina inmovilizada en la síntesis de la endorfina kyotorfina (Tyr-Arg), utilizando disolventes orgánicos como medio de reacción. Se desarrolla una revisión general de la síntesis enzimática de péptidos, que pone de manifiesto el interés de dichos compuestos, así como la importancia de las estrategias de reacción empleadas. Se analiza el mecanismo cinético de desactivación y desnaturalización de la enzima, estableciéndose una relación cuantitativa entre ambos procesos, y proponiéndose un modelo cinético en dos etapas con un intermedio activo. Se estudia la síntesis de kyotorfina en presencia de cinco disolventes orgánicos, estableciéndose una correlación directa entre la actividad sintética y las características del medio, a saber, log Pi, Aw y contenido en agua del derivado. Se analizan los efectos de dichos disolventes sobre la actividad sintética de la enzima soluble y su relación sobre la desnaturalización enzimática mediante medidas de fluorescencia, concluyéndose que el incremento de la hidrofobicidad del medio incrementa la selectividad de la reacción. Se estudia la estabilidad de la enzima inmovilizada y la influencia de los disolventes miscibles con agua, que estuvo en relación directa a la hidrofobicidad de los mismos. Se optimizan las condiciones de síntesis de kyotorfina en un sistema anhidro hexano:etanol y se analiza la influencia del sorbitol como aditivo estabilizante, obteniéndose los mejores niveles de actividad y estabilidad.